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chlamy木蟲 (小有名氣)
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[求助]
菌液PCR呈陽性，但質(zhì)粒做PCR卻做不出來
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各位蟲友： 最近用做酶切連接，挑克隆。用煮沸的菌液上清做PCR的模板，質(zhì)粒上特有序列做引物，能夠擴(kuò)增出來。并且以這次的擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，再用其中內(nèi)部的一對(duì)引物進(jìn)行PCR，也能擴(kuò)增出目的條帶出來，但我用提取的質(zhì)粒做PCR的模板時(shí)就是P不出來，這是怎么回事呢？請(qǐng)高手指點(diǎn)…… 先謝過。 注：已經(jīng)試過DH5a和JM109兩種菌株， 自己猜測(cè)過是不是整合到基因組上去了，加熱煮沸菌體的上清中混有細(xì)菌的基因組DNA，故菌液可以擴(kuò)增出，但質(zhì)粒不可以啊。 |
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atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
chlamy: 金幣+1, ★有幫助 2012-04-29 00:32:36
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嗯..................... 我覺得啊，沒那么復(fù)雜，你可先試試雙酶切，看能不能把切下你的PCR條帶，或你PCR產(chǎn)物上有質(zhì)粒上沒有的酶切位點(diǎn)是否酶切后正常線性化，要是實(shí)在頭疼，建議送測(cè)，正反一個(gè)反應(yīng)確定是你的東西就可以了 PCR太詭異，一切都不好說............ 個(gè)人看法 若有說錯(cuò)請(qǐng)高手指點(diǎn)  |
2樓2012-04-29 00:10:11
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3樓2012-04-29 00:32:24
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