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chlamy木蟲 (小有名氣)
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[求助]
菌液PCR呈陽性，但質粒做PCR卻做不出來
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各位蟲友： 最近用做酶切連接，挑克隆。用煮沸的菌液上清做PCR的模板，質粒上特有序列做引物，能夠擴增出來。并且以這次的擴增產(chǎn)物為模板，再用其中內(nèi)部的一對引物進行PCR，也能擴增出目的條帶出來，但我用提取的質粒做PCR的模板時就是P不出來，這是怎么回事呢？請高手指點…… 先謝過。 注：已經(jīng)試過DH5a和JM109兩種菌株， 自己猜測過是不是整合到基因組上去了，加熱煮沸菌體的上清中混有細菌的基因組DNA，故菌液可以擴增出，但質粒不可以啊。 |
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3樓2012-04-29 00:32:24
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
chlamy: 金幣+1, ★有幫助 2012-04-29 00:32:36
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應助 2012-04-29 15:33:22
chlamy: 金幣+4, ★★★很有幫助 2012-06-21 11:40:37
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chlamy: 金幣+4, ★★★很有幫助 2012-06-21 11:40:37
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嗯..................... 我覺得啊，沒那么復雜，你可先試試雙酶切，看能不能把切下你的PCR條帶，或你PCR產(chǎn)物上有質粒上沒有的酶切位點是否酶切后正常線性化，要是實在頭疼，建議送測，正反一個反應確定是你的東西就可以了 PCR太詭異，一切都不好說............ 個人看法 若有說錯請高手指點  |
2樓2012-04-29 00:10:11
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