 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1528 | 回復(fù): 6 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
濤濤不絕1988新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
魚類線粒體DNA的提取 已有1人參與
|
||
|
我最近在做魚類線粒體DNA的提取，用的常規(guī)的堿裂解法提取的，提了7、8次了，但是跑完膠之后除了Maker什么也沒有，急啊~ 求高手幫忙分析一下，謝了！ （具體步驟：1、取動物組織2-8g，用SE緩沖夜漂洗，剪碎，加入約30mlSE緩沖液，0℃勻漿,1500rpm 10min,取上清 12000rpm 15min，沉淀物為線粒體，用STM溶液洗一遍。 2、以溶液體積與組織重量0.2ml:1g的STM溶液懸浮線粒體，加DNaseA溶液，（終濃度達到100ug/ml）30℃水浴30min,加EDTA溶液（至終濃度10mmol/L）搖勻，10000rpm 10min，沉淀即線粒體。 3、取部分線粒體用Janus Green B染色并觀察線粒體的數(shù)目、大小。 4、剩余的線粒體用SE緩沖液洗一遍，然后用4mlSE溶液懸浮純凈線粒體，均分于4支EP管中。 5、12000rpm 10min；棄上清液，每管加150ulTEN溶液，懸浮沉淀，各加入300ul新配制的溶液Ⅴ，混合均勻，冰浴10min；再各加入225ul冷的KAc溶液，冰浴30min。 6、12000rpm 10min，取上清液; 加人與上清液等體積的飽和酚, 輕搖15min; 12000rpm 10min,取上清液; 加人與上清液等體積的氯仿-異戊醇(24 : 1 ) ,充分混合均勻，輕搖15min。12000rpm 10min, 吸取水相。 7、加入1/10體積的3mol/L、PH5.2的醋酸鈉，再加入兩倍體積無水乙醇，冰浴30min，12000rpm 10min,加入冷的（0℃）70%乙醇溶液洗一次，12000rpm 2min。自然干燥3-4 h或4℃ 冰箱中過夜徹底干燥；加入適量TE完全溶解。 8、加入DNase-free的RNaseA溶液（終濃度200ul/ml），37℃消化60min。重復(fù)步驟6和7。 9、取一部分溶液檢測mtDNA的純度和濃度，其余-20℃?zhèn)溆谩＃? |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有261人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 動植物樣品的采集及DNA樣品的提取(ZT)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- DNA的提取簡介，包括法醫(yī)DNA的提取方法！
已經(jīng)有54人回復(fù)
- 求助葉綠體線粒體分離提取
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 提取線粒體DNA
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 線粒體DNA純化前亮帶單一，純化后出現(xiàn)亮暗各一條帶
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助】【急】請問有誰做過細胞核STR分型檢測和線粒體DNA測序？急求詳細方法！
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】線粒體的提取及活性檢測
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助】從細胞中提取的線粒體還能保持原有的生理活性嗎？
已經(jīng)有10人回復(fù)
mitocam
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 46 (小學(xué)生)
- 金幣: 1114.5
- 散金: 93
- 紅花: 2
- 帖子: 728
- 在線: 152.1小時
- 蟲號: 1899939
- 注冊: 2012-07-19
- 專業(yè): 細胞呼吸與代謝
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2012-08-18 15:16:41
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2012-08-18 15:16:41
|
問題可能在于DNAse。抽提過程中線粒體膜破裂，DNase把mtDNA給降解了。線粒體其實不是教科書所說的一粒一粒的，而是空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，抽提時就有可能線粒體膜破裂了。 能否不用DNase？染色體的DNA很長很大而且結(jié)合很多組蛋白，溫和裂解細胞后很容易被離心沉淀下來的，而線粒體DNA小的多。所以用常用的RNA抽提辦法，就可以抽提出RNA和mtDNA，然后用RNAase降解RNA，剩下的就是mtDNA。 |
4樓2012-08-18 05:55:15
xiayuling
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1609.1
- 紅花: 1
- 帖子: 123
- 在線: 47.9小時
- 蟲號: 1792856
- 注冊: 2012-05-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2012-05-09 10:14:26
濤濤不絕1988
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 54
- 帖子: 8
- 在線: 8.5小時
- 蟲號: 1287390
- 注冊: 2011-05-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 男性生殖系統(tǒng)炎癥與感染
3樓2012-08-17 19:46:23
xiayuling
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1609.1
- 紅花: 1
- 帖子: 123
- 在線: 47.9小時
- 蟲號: 1792856
- 注冊: 2012-05-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學(xué)
5樓2012-08-18 17:24:44
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩，一志愿湖南大學(xué)，初試成績338 +7 | YYYYYNNNNN 2026-03-26 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 08工科，295，接受跨專業(yè)調(diào)劑 +3 | lmnlzy 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩調(diào)劑 +11 | 椰椰。 2026-03-29 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +10 | lin0039 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 337求調(diào)劑 +6 | 《樹》 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 汲亦昊 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +7 | 璞玉~~ 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 312，生物學(xué)求調(diào)劑 +3 | 小譯同學(xué)abc 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +12 | PolarBear11 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +10 | jjjjjjjjjjl 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 266分求材料化工冶金礦業(yè)等專業(yè)的調(diào)劑 +4 | 哇呼哼呼哼 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 一志愿 西北大學(xué) 總分282 英語一62 求調(diào)劑
+7
|
18419759900 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +5 | 哇盧卡庫 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | Pigcasso 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | wasdssaa 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求調(diào)劑 +4 | 李李不服輸 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩331求調(diào)劑 +4 | 鮮當(dāng)牛 2026-03-24 | 4/200 |
|