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雨玫天晴新蟲 (小有名氣)
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[求助]
組織塊貼壁法培養(yǎng)細胞如何做？
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各位各位這里瞧下下哈，我是個菜鳥級別的，問一下菜鳥問題哦～那個組織塊貼壁培養(yǎng)細胞具體是個啥子過程嘞？細胞不純的話，怎么消化怎么傳代��？謝謝各位咯*^_^* [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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雨玫天晴
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6樓2012-05-10 19:38:02
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
zhaohq1209: 金幣+3, BioEPI+1, telomerase: 金幣+4, 歡迎新蟲！！！ 歡迎多多交流！！ 2012-05-09 09:13 2012-05-09 10:02:03
zhaohq1209: 金幣+3, BioEPI+1, telomerase: 金幣+4, 歡迎新蟲！！！ 歡迎多多交流！！ 2012-05-09 09:13 2012-05-09 10:02:03
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很久以前做的，做法如下： 實驗所要用的工具都應(yīng)滅菌消毒。首先，在實驗前24h于60×15mm的培養(yǎng)皿內(nèi)鋪上血清，將鋪有血清的培養(yǎng)皿放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi)。。。。。。組織取出，用PBS將其沖洗干凈。將組織切割成1mm3左右的小塊。在剪切過程中，可以適當(dāng)?shù)南蚪M織上滴1～2滴培養(yǎng)液，以保持濕潤。然后，將剪切好的組織塊用眼科鑷均勻鋪于事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿內(nèi),加入少量含20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，以組織塊不在培養(yǎng)液內(nèi)漂浮為宜，然后把培養(yǎng)皿放置在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)。放置2～4h后待組織小塊貼附于培養(yǎng)皿，加入含20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，在37℃含5%的CO2的條件下培養(yǎng)，待1～2天后細胞由組織中游出，摘掉組織塊并用PBS清洗培養(yǎng)皿去除死細胞和組織殘留物，加入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。待培養(yǎng)皿中的細胞長滿后用胰蛋白酶將其消化下來，轉(zhuǎn)入50ml的塑料培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，此時的細胞我們稱其為原代。。。。細胞。 至于純化，我做的是肺的，細胞相對含量不復(fù)雜，我要的細胞含量很高，所以穿幾代，就純化得差不多了。 要是肝的，那就不好做了。。。。。 |
2樓2012-05-09 09:13:08
雨玫天晴
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3樓2012-05-10 00:18:59
4樓2012-05-10 13:22:43
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