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幫我看一下 關(guān)于霉菌提基因組進(jìn)行pcr的實(shí)驗(yàn) 做不粗來啊
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先說我的霉菌dna提取方法： 1：取一定量菌體放入ep管中，加入0.8ml溶液1（山梨醇0.9mol/l+0.1mol/lEDTA），加入0.1ml蝸牛酶30mg/ml，37℃水浴1h，離心去上清液。 2：沉淀加入0.8ml溶液2（tris 50mmol/l，20mmol/lEDTA），加入0.1ml 10%SDS水浴65℃30min，加入醋酸鉀冰浴1h。 3：離心取上清，加入等體積苯酚氯仿異戊醇（25 24 1），離心取上清，加入二倍體積乙醇沉淀dna。 4：dna溶于TE緩沖液中備用。 之后進(jìn)行5.8s pcr擴(kuò)增，但是我所做的霉菌種只有一個(gè)霉菌可以擴(kuò)增出來別的霉菌擴(kuò)增不出來。 我分析應(yīng)該還是DNA提取的問題，請(qǐng)高手指點(diǎn)一下，真的很發(fā)愁啊，以下是我dna的電泳圖，和pcr的電泳圖。 這個(gè)是DNA電泳圖 這個(gè)是PCR后的電泳圖 |
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holyala
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2樓2012-05-11 16:16:26
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-05-11 17:42:11
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| 哦，提DNA的方法細(xì)節(jié)上有一點(diǎn)點(diǎn)問題，抽提蛋白就只用酚：氯仿：異戊醇（25/24/1）抽提一次？？那殘留的酚怎么辦~？通常我們都會(huì)在這一步之后再用氯仿：異戊醇（24/1）抽一次，再用氯仿抽一次，這樣蛋白和酚都除得比較干凈了。還有，加二倍體積的無水乙醇沉淀也不是不行啦，但是乙醇又不貴，為什么不能加到三倍體積呢？這樣沉淀效率會(huì)高一點(diǎn)，避免損失吧。 |
3樓2012-05-11 16:21:38
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