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油藏微生物16S rDNA的擴增沒有任何條帶出現(xiàn)，請問是什么因素導(dǎo)致？
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畢業(yè)論文是16S rDNA的擴增為基礎(chǔ)的論文 引物4A、4S，擴增長片段，酶用的是商業(yè)用的taq聚合酶，體系是25ul體系，瓊脂糖凝膠電泳 前期DNA提取都很順利，跑電泳也出現(xiàn)了比較明顯的條帶，雖然不多但是還是很亮很明顯。等到開始擴增16S rDNA的時候怪事就發(fā)生了，擴增后跑出來的電泳圖完全沒有任何條帶出現(xiàn)。 最開始在老師的指導(dǎo)下將所有的酶和引物重新?lián)Q過來做仍然是沒有任何圖條帶的出現(xiàn)。因為模版當(dāng)時只加了1ul而已所以覺得應(yīng)該是模版太少了，改加了2ul仍然是沒結(jié)果。之后又改過退火溫度和延伸時間仍然是無功而返。只是有的時候會出現(xiàn)一條或者兩條不是很明顯的沒有分界線的拖尾條帶，兩個月的實驗時間中只出現(xiàn)過兩次拖尾特別暗的不明顯條帶，之后就再也沒出現(xiàn)過條帶。 之后又在別人那里借了四個不同的模版回來接著做，結(jié)果仍然是沒有任何條帶出現(xiàn)。于是我開始懷疑是否是引物出現(xiàn)問題，老師說上一屆的學(xué)生用這個引物做出來過要我絕對相信引物的可用性。還有十天多天就答辯了實驗仍然是卡在PCR上不行，求助各位高手出現(xiàn)這樣的情況要怎么解決。 下面是圖 第二張惟一的條帶還是拖尾條帶，再次擴增的時候按同樣的條件卻怎么也不出現(xiàn)條帶 DNA提取電泳圖 16S rDNA擴增后電泳圖 |
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