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微露晨曦新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助western mark 轉(zhuǎn)膜不全，急！
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| 我用的濕轉(zhuǎn)，蛋白分子量分別是220,54,36，電泳時(shí)挺好，mark都出來(lái)了，轉(zhuǎn)膜的時(shí)候發(fā)現(xiàn)大分子量的mark沒(méi)出來(lái)，我轉(zhuǎn)膜的條件是300mA,電壓最大。請(qǐng)各位給分析一下什么原因啊 |
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atlanticwi
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-05-21 13:38:47
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-05-21 13:38:47
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嗯.................... 不知道為什么總覺(jué)得你這幾個(gè)蛋白放一起轉(zhuǎn)有點(diǎn)勉強(qiáng) 我以前也是聽(tīng)別人說(shuō)濕轉(zhuǎn)法很好（自己一直用半干法） 能將Marker整個(gè)都上去 但我自己用MBI的Marker從來(lái)都沒(méi)有這個(gè)效果 要不就是小分子量的集中在一起（80下）要不就是大分子量的一起（120上）大分量一般明顯出現(xiàn)在膜上時(shí) 小分量的絕對(duì)就被打穿到下濾紙.....調(diào)整電流和轉(zhuǎn)膜時(shí)間都起不到好效果.......所以就放棄了 總之個(gè)人覺(jué)得調(diào)整電流沒(méi)有什么用處 應(yīng)該在Buffer上下功夫 有沒(méi)有加甲醇 SDS之類的或者就干脆把這幾種蛋白分開(kāi)來(lái)轉(zhuǎn)會(huì)好些吧 個(gè)人看法 若有說(shuō)錯(cuò)請(qǐng)高手指點(diǎn) |
2樓2012-05-20 21:20:24
蛋蛋寶貝
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8樓2012-05-23 13:09:13
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