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微露晨曦新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助western mark 轉(zhuǎn)膜不全，急！
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| 我用的濕轉(zhuǎn)，蛋白分子量分別是220,54,36，電泳時挺好，mark都出來了，轉(zhuǎn)膜的時候發(fā)現(xiàn)大分子量的mark沒出來，我轉(zhuǎn)膜的條件是300mA,電壓最大。請各位給分析一下什么原因啊 |
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蛋蛋寶貝
新蟲 (初入文壇)
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3樓2012-05-20 21:29:55
atlanticwi
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2012-05-21 13:38:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2012-05-21 13:38:47
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嗯.................... 不知道為什么總覺得你這幾個蛋白放一起轉(zhuǎn)有點勉強 我以前也是聽別人說濕轉(zhuǎn)法很好（自己一直用半干法） 能將Marker整個都上去 但我自己用MBI的Marker從來都沒有這個效果 要不就是小分子量的集中在一起（80下）要不就是大分子量的一起（120上）大分量一般明顯出現(xiàn)在膜上時 小分量的絕對就被打穿到下濾紙.....調(diào)整電流和轉(zhuǎn)膜時間都起不到好效果.......所以就放棄了 總之個人覺得調(diào)整電流沒有什么用處 應(yīng)該在Buffer上下功夫 有沒有加甲醇 SDS之類的或者就干脆把這幾種蛋白分開來轉(zhuǎn)會好些吧 個人看法 若有說錯請高手指點 |
2樓2012-05-20 21:20:24
微露晨曦
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4樓2012-05-20 22:15:06
微露晨曦
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5樓2012-05-20 22:18:39
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