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[求助]
DNA 3' 5'問題
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小白求問各位大神： 1. DNA的5'端磷酸末端和3'羥基末端是正常情況下的吧？那何時(shí)會(huì)出現(xiàn)3'磷酸末端還有5'羥基末端？是用酶作用的么？哪些酶搞的？ 2. lambda 外切酶切的是雙鏈DNA的5' 磷酸化鏈，這個(gè)磷酸化是不是不同于DNA5'端本身有的磷酸末端？那它具體是什么意思呢？ 3. 用酶切反應(yīng)的時(shí)候，有一個(gè)酶的反應(yīng)緩沖液，請(qǐng)問，稀釋這個(gè)緩沖液是用什么呢？純水？還是其它緩沖液？比如用于單鏈雜交成雙鏈的PBS加鎂緩沖液可以么？ 4. 緩沖液怎么用呢，比如說我拿的是10倍的緩沖液，是不是我的DNA溶液有180微升時(shí)，就加20微升緩沖液，這樣正好是1倍的緩沖液呢？ 求問各位大神，助我解惑啊，多謝多謝 |
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 Aptamer_Biosensor | 【分子生物】EPI帖 |
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atlanticwi
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+5, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-05-23 14:07:46
暫定: 金幣+5, ★★★很有幫助, 多謝您回答啦 2012-05-23 14:17:50
西瓜: MolEPI+1, 補(bǔ)上EPI。辛苦哈 2012-05-27 12:52:21
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西瓜: MolEPI+1, 補(bǔ)上EPI。辛苦哈 2012-05-27 12:52:21
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嗯................... 1. 是有酶作用的 比方說做RACE中就有用到堿性磷酸酶 可以作用脫掉5‘的磷酸基團(tuán) 2. 這個(gè)外切酶應(yīng)該識(shí)別的是5’的磷酸化基團(tuán) （沒有做過 個(gè)人理解） 3. 你指的稀釋是用ddH2O來補(bǔ)足體系吧 這樣的話一般滅菌蒸餾水或millipore級(jí)純水就可以了 不用緩沖液的 用了緩沖液可能帶來額外的離子和影響離子強(qiáng)度從而對(duì)酶切產(chǎn)生作用 4. 正如你所說10X換算成1X就拿你的溶液/9的體積來添加緩沖液就可以了 個(gè)人看法 若有說錯(cuò)請(qǐng)高手指點(diǎn)  |
2樓2012-05-23 12:48:48
3樓2012-05-23 14:19:32
atlanticwi
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5樓2012-05-23 15:38:45
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