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kyoya金蟲 (初入文壇)
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[求助]
熒光定量sybrgreen染料熒光值大小的問題
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最近在做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，機(jī)器是羅氏480，sybrgreen染料是購買的伯樂的，看別人做的擴(kuò)增曲線熒光信號的值大約在40左右，而自己的熒光信號卻在110左右，是染料的原因嗎？還有我的擴(kuò)增曲線不是S型的，該怎么進(jìn)行優(yōu)化？謝謝大家了。 |
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zgb1982
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2樓2012-05-24 09:33:34
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8樓2012-05-25 10:18:16
【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜: 金幣+2, 補(bǔ)上…… 2012-05-25 18:56:56
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| 你的熒光起跳太晚了，一般在15左右比較好，可能是模板中的濃度不高，引物設(shè)計(jì)問題或者是你的酶效率不好，這些問題都是可能的，你說的S型，是指過了對其增長期后的平臺期，這也是因?yàn)槟愕臒晒庑盘柶鹛鴷r循環(huán)數(shù)高，還未達(dá)到平臺期的原因，不過這樣數(shù)據(jù)沒問題，你應(yīng)該不用循環(huán)結(jié)束的拷貝數(shù)吧，祝實(shí)驗(yàn)順利！ |
9樓2012-05-25 14:06:13
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