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kyoya金蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
熒光定量sybrgreen染料熒光值大小的問(wèn)題
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最近在做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，機(jī)器是羅氏480，sybrgreen染料是購(gòu)買的伯樂(lè)的，看別人做的擴(kuò)增曲線熒光信號(hào)的值大約在40左右，而自己的熒光信號(hào)卻在110左右，是染料的原因嗎？還有我的擴(kuò)增曲線不是S型的，該怎么進(jìn)行優(yōu)化？謝謝大家了。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜: , 鼓勵(lì)交流 2012-05-25 18:56:47
西瓜: 金幣+2, 補(bǔ)上…… 2012-05-25 18:56:56
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜: , 鼓勵(lì)交流 2012-05-25 18:56:47
西瓜: 金幣+2, 補(bǔ)上…… 2012-05-25 18:56:56
| 你的熒光起跳太晚了，一般在15左右比較好，可能是模板中的濃度不高，引物設(shè)計(jì)問(wèn)題或者是你的酶效率不好，這些問(wèn)題都是可能的，你說(shuō)的S型，是指過(guò)了對(duì)其增長(zhǎng)期后的平臺(tái)期，這也是因?yàn)槟愕臒晒庑盘?hào)起跳時(shí)循環(huán)數(shù)高，還未達(dá)到平臺(tái)期的原因，不過(guò)這樣數(shù)據(jù)沒(méi)問(wèn)題，你應(yīng)該不用循環(huán)結(jié)束的拷貝數(shù)吧，祝實(shí)驗(yàn)順利！ |
9樓2012-05-25 14:06:13
zgb1982
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2樓2012-05-24 09:33:34
chlorella409
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3樓2012-05-24 10:25:08
孫啟亮
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4樓2012-05-24 11:21:58
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