 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2566 | 回復(fù): 19 | ||
wsw2t銀蟲 (初入文壇)
|
[求助]
請教各位大俠：雙向電泳蛋白定量用bradford法的問題��！
|
|
雙向電泳提肌肉蛋白，提完后用bradford方法測蛋白濃度，但包括標(biāo)準(zhǔn)曲線在內(nèi)，值不停變動，不知道問題出在哪里，求救！具體方法如下： 用蒸餾水配1mg/ml BSA，各試管分別加入0，10ul，20ul，40ul，60ul，80ul，100ul，用裂解液補(bǔ)齊到100ul。之所以用裂解液，是因?yàn)闃悠肥怯昧呀庖喝艿�，而且裂解液中含�?M的尿素，居然尿素也要跟考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)。再加入5ml 考馬斯亮藍(lán)，用過試劑盒里的考馬斯亮藍(lán)，也自己配過�；靹蚝罅⒓礈y，也做過5min后測，10min后測，但在595nm下吸光值不斷增大，不穩(wěn)定。 不知道各位有沒有碰到類似的情況？是什么原因造成的呢？這樣測出來的蛋白濃度不敢相信啊，只能估測個(gè)大概，但后面做雙向電泳，是不是還是應(yīng)該比較準(zhǔn)確地定量呢，因?yàn)楹竺娼Y(jié)果分析里面，蛋白點(diǎn)差異1.5倍就算是差異蛋白了，如果定量不準(zhǔn)確的話，如果是上樣原因造成的，那可如何是好��！由于上樣引起的差異是不是可以在后面用軟件去掉？ 另，做雙向電泳的同學(xué)都是用什么方法定量的呢？ 剛開始做，很菜鳥，忘各位不吝賜教，萬分感激！ |
回復(fù)此樓» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
xiucai_2012» 猜你喜歡
考研求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085601材料工程專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
296求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
0703化學(xué)調(diào)劑 ，六級已過，有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
268求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 雙向電泳條紋等問題求助
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 跑植物葉片蛋白的雙向電泳 需要點(diǎn)Mark嗎 多大分子量的啊 還有 多大的膠條可以啊
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 雙向電泳，等電聚焦后，膠條酸端，總是能看到白色蛋白，這該怎么解決啊 ？？？？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 蛋白質(zhì)定量技術(shù)--BCA 和bradford法比較
已經(jīng)有3人回復(fù)
- Ebook__《雙向電泳原理與方法》第三版
已經(jīng)有281人回復(fù)
- 請教大家關(guān)于雙向電泳的問題~
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 我想從油滴中富集分泌出的蛋白質(zhì)，已達(dá)到做雙向電泳所需的上樣量，有什么方法？謝謝。
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 雙向電泳，蛋白樣品除鹽有用透析的嗎？好操作嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 雙向電泳，蛋白定量測定用方法的討論
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 雙向電泳，剛提出來的總蛋白，在裂解液里可以4度放多久��？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 雙向電泳提總蛋白，如何除鹽啊？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 關(guān)于SDS-PAGE與雙向電泳的請教
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 雙向電泳 蛋白純化
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于Bradford法測蛋白含量的問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】考馬斯亮蘭法（Bradford法）測定蛋白濃度事宜請教！
已經(jīng)有7人回復(fù)
Rubisco580
金蟲 (小有名氣)
- BioEPI: 4
- 應(yīng)助: 66 (初中生)
- 金幣: 997.7
- 紅花: 7
- 帖子: 264
- 在線: 48.5小時(shí)
- 蟲號: 553802
- 注冊: 2008-05-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yqbter: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2012-05-24 10:59:39
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yqbter: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2012-05-24 10:59:39
|
不確定是咋回事，但我做的時(shí)候補(bǔ)齊100ul是用去離子水。不知道裂解液會不會影響反應(yīng)。待測樣品由于量很少，尿素的影響不會很大。 加入考馬斯亮藍(lán)后需要反應(yīng)5～10min，在30min左右測完。 同一批樣品在一起檢測，誤差是相似的。 定量更主要是為了保證批間差異不至于過大，結(jié)果能重復(fù)。雙向的重復(fù)性本來就很差。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
2樓2012-05-24 10:55:18
xhjggl
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 43 (小學(xué)生)
- 金幣: 2889.3
- 散金: 150
- 紅花: 7
- 帖子: 556
- 在線: 190.9小時(shí)
- 蟲號: 95496
- 注冊: 2005-10-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
3樓2012-05-24 11:34:34
wsw2t
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 261.9
- 散金: 28
- 帖子: 37
- 在線: 36.6小時(shí)
- 蟲號: 1395930
- 注冊: 2011-09-09
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
4樓2012-05-24 14:16:51
wsw2t
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 261.9
- 散金: 28
- 帖子: 37
- 在線: 36.6小時(shí)
- 蟲號: 1395930
- 注冊: 2011-09-09
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
5樓2012-05-24 14:31:25
hyacinth326
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 74 (初中生)
- 金幣: 2003.3
- 散金: 304
- 紅花: 4
- 帖子: 394
- 在線: 1338.8小時(shí)
- 蟲號: 1502977
- 注冊: 2011-11-21
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
6樓2012-05-24 16:32:33
趙效冬
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 2184.2
- 紅花: 1
- 帖子: 52
- 在線: 114.3小時(shí)
- 蟲號: 1243822
- 注冊: 2011-03-24
- 專業(yè): 心腦血管藥物藥理
7樓2012-05-24 23:40:40
colorfulmiao
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 16 (小學(xué)生)
- 金幣: 1965.3
- 散金: 100
- 紅花: 9
- 帖子: 153
- 在線: 72.3小時(shí)
- 蟲號: 1548678
- 注冊: 2011-12-23
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
8樓2012-05-25 11:05:37
S0817010
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 17 (小學(xué)生)
- 金幣: 1234.1
- 散金: 100
- 紅花: 2
- 帖子: 547
- 在線: 51小時(shí)
- 蟲號: 1230121
- 注冊: 2011-03-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
9樓2012-05-25 16:18:21
wsw2t
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 261.9
- 散金: 28
- 帖子: 37
- 在線: 36.6小時(shí)
- 蟲號: 1395930
- 注冊: 2011-09-09
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
10樓2012-05-25 16:25:45
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 wsw2t 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +5 | 大口吃飯 身體健 2026-03-13 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +8 | 小熊joy 2026-03-14 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，總分315，考的生物醫(yī)藥，一志愿湖南師范大學(xué)。調(diào)劑到任何專業(yè)都可以 +4 | 小丁想進(jìn)步 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5 | ly3471z 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調(diào)劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調(diào)劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +4 | 學(xué)海漂泊 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料080500調(diào)劑求收留 +3 | 一顆meteor 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +6 | 邱gl 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +4 | 番茄頭--- 2026-03-10 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料371求調(diào)劑 +9 | 鱷魚? 2026-03-11 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料專碩288分求調(diào)劑 一志愿211 +4 | 在家想你 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料科學(xué)與工程/總分295/求收留 +9 | 2026調(diào)劑俠 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 【考研調(diào)劑求收留】 +3 | Ceciilia 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)學(xué)校調(diào)劑 +3 | 周56 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 土木第一志愿276求調(diào)劑，科研和技能十分豐富，求新興方向的導(dǎo)師收留 +3 | 土木小天才 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 資源與環(huán)境 285 +3 | 未名考生 2026-03-10 | 3/150 |
|