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wsw2t銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
請教各位大俠：雙向電泳蛋白定量用bradford法的問題！！
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雙向電泳提肌肉蛋白，提完后用bradford方法測蛋白濃度，但包括標準曲線在內(nèi)，值不停變動，不知道問題出在哪里，求救！具體方法如下： 用蒸餾水配1mg/ml BSA，各試管分別加入0，10ul，20ul，40ul，60ul，80ul，100ul，用裂解液補齊到100ul。之所以用裂解液，是因為樣品是用裂解液溶的，而且裂解液中含有8M的尿素，居然尿素也要跟考馬斯亮藍反應。再加入5ml 考馬斯亮藍，用過試劑盒里的考馬斯亮藍，也自己配過�；靹蚝罅⒓礈y，也做過5min后測，10min后測，但在595nm下吸光值不斷增大，不穩(wěn)定。 不知道各位有沒有碰到類似的情況？是什么原因造成的呢？這樣測出來的蛋白濃度不敢相信啊，只能估測個大概，但后面做雙向電泳，是不是還是應該比較準確地定量呢，因為后面結果分析里面，蛋白點差異1.5倍就算是差異蛋白了，如果定量不準確的話，如果是上樣原因造成的，那可如何是好��！由于上樣引起的差異是不是可以在后面用軟件去掉？ 另，做雙向電泳的同學都是用什么方法定量的呢？ 剛開始做，很菜鳥，忘各位不吝賜教，萬分感激！ |
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