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快樂春想新蟲 (初入文壇)
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[求助]
DGGE跑膠時出現(xiàn)一坨的苦惱�。�！
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求指教： 我用DGGE法做土壤里的細菌群落，DNA是用OMEGA的試劑盒提的，效果不錯，PCR用巢式，第一輪引物F27和R1492，第二輪引物GC-338F和518R，瓊脂糖電泳結(jié)果也挺亮的。DGGE用的8%的膠，40%-60%，60V，15h，然后銀染，出來的結(jié)果全是下邊出現(xiàn)兩坨，然后再往下就沒有條帶了。剛開始做DGGE，自己摸索，不斷出現(xiàn)問題，特在此請教各位專家，要怎樣解決這個坨的問題呢？？？ 還有，跑第一次DGGE后，拿去測序，套峰太多，又拿第一次切膠后的產(chǎn)物做了PCR，條件與第二輪PCR相同，然后又跑了一次DGGE，有一個主條帶，但還是有好幾個細條帶，想接著進行測序，應(yīng)該怎么辦呢？？如果是做克隆，挑多少斑比較好呢？ 巢式PCR之后的結(jié)果 第一次DGGE結(jié)果 不好意思，這個傳錯了，嘻嘻，沒弄明白在哪兒刪除 第一次DGGE切膠后結(jié)果 第一次切膠后的PCR產(chǎn)物進行第二次DGGE后的結(jié)果 第二次DGGE后切膠PCR的結(jié)果 |
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dreams木蟲
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2樓2012-05-30 13:45:00
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3樓2012-06-01 10:34:16
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