 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 1728 | 回復(fù): 11 | |||
[求助]
克隆目的基因
|
|||
|
一直在從一個全基因組不知道的菌種克隆目的基因，最近根據(jù)同源性設(shè)計了兼并引物�，F(xiàn)在遇到了以下這些問題： 1.用兼并引物P目的片段時，使用梯度PCR做的，確定退火溫度在58—65之間都有條帶，最后回收膠，做連接，轉(zhuǎn)化，藍白斑篩選，挑了18個白斑進行菌落PCR，發(fā)現(xiàn)沒有目標(biāo)條帶。（注：因為是新手，切膠回收時切得有些寬，師姐說可能回收率太低） 2.介于上次失敗，所以就從頭開始做一次克隆，所選的退火溫度是62℃。但是這次居然沒有P出來。  只有一條很淡的條帶，這也沒法回收啊。所以請高手指點一下啦。萬分感謝。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有181人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 新的表達一直誘導(dǎo)不出來
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 基因克隆中酶切連接問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 請問能不能僅克隆單一基因的一小片段
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 一個關(guān)于水稻基因圖位克隆的問題誠摯懇求大牛解答
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 已知全長基因怎樣克隆并構(gòu)建表達載體
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 有人找公司合成過目的基因嗎
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】如何降低，多克隆抗體非特異性？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因克隆總不成功
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】只知道基因功能，但不知序列位置，怎樣克隆目的基因
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】求助基因克隆方面的問題解決方案
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于目的基因的克隆
已經(jīng)有12人回復(fù)
8樓2012-05-28 21:40:08
克隆大蝦
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 133 (高中生)
- 金幣: 6015.9
- 散金: 236
- 紅花: 10
- 帖子: 2367
- 在線: 1337.3小時
- 蟲號: 93868
- 注冊: 2005-09-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
2樓2012-05-28 00:45:26
克隆大蝦
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 133 (高中生)
- 金幣: 6015.9
- 散金: 236
- 紅花: 10
- 帖子: 2367
- 在線: 1337.3小時
- 蟲號: 93868
- 注冊: 2005-09-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2012-05-28 00:47:30
maoyong
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 2594.1
- 帖子: 122
- 在線: 61.5小時
- 蟲號: 1200618
- 注冊: 2011-02-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2012-05-28 08:16:19
yinchu1990 
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 163.4
- 散金: 677
- 紅花: 11
- 帖子: 123
- 在線: 32.1小時
- 蟲號: 1505986
- 注冊: 2011-11-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
5樓2012-05-28 09:01:00
trizol11
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 47 (小學(xué)生)
- 金幣: 2714.2
- 散金: 199
- 紅花: 3
- 帖子: 572
- 在線: 172.8小時
- 蟲號: 1711824
- 注冊: 2012-03-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 獸醫(yī)藥理學(xué)與毒理學(xué)
6樓2012-05-28 12:51:13
jasonwyb123
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 59 (初中生)
- 金幣: 1229.6
- 紅花: 1
- 帖子: 205
- 在線: 29.5小時
- 蟲號: 1751129
- 注冊: 2012-04-12
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流 2012-05-28 16:01:25
hraikeyan: 金幣+2 2012-05-28 21:40:26
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流 2012-05-28 16:01:25
hraikeyan: 金幣+2 2012-05-28 21:40:26
|
你這種情況很正常，需要多嘗試一下 第一，你不一定就局限于62°，可以換一個， 第二，切膠時盡量少切沒用的空白膠，我有個師兄號稱是“劉三刀”，因為再難看的膠他三刀之內(nèi)都切的不錯，可以學(xué)習(xí)這個，反正盡量把膠切薄，切少 第三，聚落pcr效率有點差，你可以用1ml的管子小搖一下，37°估計2~3h就差不多了吧，具體忘記了，之后菌液p或者抽質(zhì)粒再做 |
7樓2012-05-28 14:34:54
trizol11
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 47 (小學(xué)生)
- 金幣: 2714.2
- 散金: 199
- 紅花: 3
- 帖子: 572
- 在線: 172.8小時
- 蟲號: 1711824
- 注冊: 2012-03-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 獸醫(yī)藥理學(xué)與毒理學(xué)
9樓2012-05-29 12:10:53
無蹤無影
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 1822.9
- 帖子: 82
- 在線: 60.7小時
- 蟲號: 1406814
- 注冊: 2011-09-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 臨床微生物學(xué)檢驗
10樓2012-05-29 15:52:29
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 hraikeyan 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 288資源與環(huán)境專碩求調(diào)劑，不限專業(yè)，有學(xué)上就行 +11 | lllllos 2026-03-30 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +9 | kikiki7 2026-03-30 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程 085701，267求調(diào)劑 +7 | minht 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-30 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué) 296 求調(diào)劑 +5 | 朵朵- 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 367求調(diào)劑 +5 | 芋泥啵啵… 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703 化學(xué) 求調(diào)劑，一志愿山東大學(xué) 342 分 +7 | Shern—- 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +4 | wcq131415 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +8 | 加一一九 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +4 | Qshers 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +6 | Amber00 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 394求調(diào)劑 +3 | 好事多磨靜候佳?/a> 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 081200-314 +3 | LILIQQ 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +5 | 求求讓我有書讀?/a> 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個好覺_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[碩博家園] 北京林業(yè)大學(xué)碩導(dǎo)招生廣告 +6 | kongweilin 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 351求調(diào)劑 +4 | 麥克阿磊 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 085404電子信息284分求調(diào)劑
+4
|
13659058978 2026-03-24 | 4/200 |
|