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[求助]
克隆目的基因
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一直在從一個全基因組不知道的菌種克隆目的基因,最近根據(jù)同源性設(shè)計了兼并引物,F(xiàn)在遇到了以下這些問題: 1.用兼并引物P目的片段時,使用梯度PCR做的,確定退火溫度在58—65之間都有條帶,最后回收膠,做連接,轉(zhuǎn)化,藍(lán)白斑篩選,挑了18個白斑進(jìn)行菌落PCR,發(fā)現(xiàn)沒有目標(biāo)條帶。(注:因為是新手,切膠回收時切得有些寬,師姐說可能回收率太低) 2.介于上次失敗,所以就從頭開始做一次克隆,所選的退火溫度是62℃。但是這次居然沒有P出來。 只有一條很淡的條帶,這也沒法回收啊。所以請高手指點一下啦。萬分感謝。 |

銅蟲 (小有名氣)
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