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skjtg金蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基使用經(jīng)驗
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氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基 成分 蛋白胨 5g 酵母浸膏 3g 葡萄糖 1g 蒸餾水 1000mL 1.6%滇甲酚紫－乙醇溶液 1mL L－氨基酸或DL－氨基酸 0.5或1g/100mL pH6.8 制法 除氨基酸以外的成分加熱溶解后，分裝每瓶100mL，分別加入各種氨基酸：賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸。L－氨基酸按0.5%加入，DL－氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。對照培養(yǎng)基不加氨基酸。分裝于滅菌的小試管內(nèi)，每管0.5mL，上面滴加一層液體石蠟，115℃高壓滅菌10min。 試驗方法 從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種，于36±1℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。氨基酸脫羧酶陽性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。陰性者無堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。對照管應(yīng)為黃色。 我用上述的方法制作培養(yǎng)基，但用的是加1.5%瓊脂的平板，從文庫中篩選產(chǎn)脫羧酶的基因。點板后18h后發(fā)現(xiàn)：1、培養(yǎng)基沒有因為葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸變黃，還是呈淡紫色 2、每個點都長出了大腸桿菌(文庫載體為大腸桿菌) 在此向各位蟲友請教下這個培養(yǎng)基的使用經(jīng)驗，請多多幫忙！ |
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