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auau96新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
釀酒酵母基因敲除實(shí)驗(yàn)順利需多少時(shí)間 已有2人參與
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大家好 我現(xiàn)在在做釀酒酵母基因敲除 利用左右同源臂各390bp和540bp 因?yàn)楸旧砭赀z傳背景不清楚 MARKER基因既不是抗性基因和也不是缺陷型基因 用能表達(dá)的酶基因做篩選標(biāo)記 不知各位前輩是否有此類實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)來(lái)敲除目的基因 實(shí)驗(yàn)順利大概需多少時(shí)間能完成 |
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caoluoyuan
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3樓2012-06-05 14:57:55
iaminxanadu
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2樓2012-06-05 13:41:30
caoluoyuan
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4樓2012-06-05 14:58:08
auau96
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謝謝各位 不是cre/loxp 系統(tǒng) 就用長(zhǎng)片段同源重組PCR方法構(gòu)建基因敲除盒原理進(jìn)行敲除 沒(méi)有選用G418 是因?yàn)閯e人早就做過(guò)了一樣的課題 基因敲除盒的構(gòu)建設(shè)計(jì)思路：利用敲除目的基因的啟動(dòng)子和終止子來(lái)表達(dá)酶 同時(shí)敲掉目的基因 即 左側(cè)同源臂（啟動(dòng)子）+酶的CDS序列+右側(cè)同源臂（終止子） 由于之前實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有做過(guò)敲除 還不知此思路是否可行 望各位不吝賜教 謝謝 |
5樓2012-06-05 15:23:20
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