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雪湛藍鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
手提基因組方法遇到的問題
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自今年三月份開學(xué)以來，我用酚氯仿法手提一個細菌的基因組，在提的過程中，首先加入溶菌酶，帶菌體溶解后加入了10%的SDS，然后加入等體積氯仿和等體積的苯酚，離心后發(fā)現(xiàn)溶液分層，上下層透明，中間為白色蛋白質(zhì)，然而，當我吸取上層液體時發(fā)現(xiàn)，上層不是水狀液體，而是果凍狀透明體，之后無論怎么吸都無可避免的會將白色蛋白質(zhì)吸上去，以至于后期處理無法進行，得不到想要的基因組。 但是上學(xué)期，我用此方法提取該菌的基因組時，相當順利，也沒有果凍狀液體出現(xiàn)。有時認為是周圍環(huán)境溫度的問題，但是在冰上做也是得不到理想結(jié)果。所以在此求助大家，希望能得到解決辦法，或者大家能提供一個細菌基因組提取的方法。 |
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有幾點 1. SDS濃度是不是太高了？10%是母液濃度還是終濃度？一般終濃度1%就可以了。 2. SDS低溫下溶解度會下降的，所以建議控溫在20度左右裂解，而不是在冰上。 3. 有時候我在提取基因組的時候也會發(fā)現(xiàn)低溫離心后會在界面出現(xiàn)一些白色膜狀物，有時候不一定是蛋白質(zhì)，也可能是水相中低溫析出的溶解的酚，在加入乙醇或異丙醇后會溶解（蛋白不會溶解），不影響后續(xù)純化。 4. DNA樣品濃度大時本身就是粘度很大的，不用擔(dān)心，接著做就是了 |
3樓2012-06-06 21:26:57
雪湛藍
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4樓2012-06-07 11:49:39
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