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yesucao木蟲 (正式寫手)
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[求助]
熒光定量PCR擴(kuò)增曲線的分析 已有1人參與
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熒光定量PCR，儀器為ABI公司的7500，使用的是探針法，用DNA進(jìn)行擴(kuò)增。 圖1：兩條黃線為陽性對(duì)照，下面兩條為樣品，均是兩個(gè)平行樣。陽性對(duì)照曲線光滑，呈S型；但是樣品曲線呈折疊狀，與閾值有交叉點(diǎn)，且高于閾值。 出現(xiàn)擴(kuò)增曲線呈折疊狀（不光滑）的原因？？且是斷斷續(xù)續(xù)的？？ 圖2：上面兩條曲線為陽性對(duì)照，下面兩條為樣品。圖2中的樣品熒光擴(kuò)增曲線呈水平狀，出現(xiàn)這種情況是不是樣品沒有擴(kuò)增�。浚� 圖1和圖2橫坐標(biāo)相同，只是縱坐標(biāo)不一樣，兩個(gè)縱坐標(biāo)代表的含義有什么不同？為什么在圖1中樣品有明顯的擴(kuò)增，而在圖2中它的曲卻為水平狀？？出現(xiàn)這種情況能說明我的樣品擴(kuò)增出來的嗎？？ 還望各位大蝦幫忙分析一下，小女子不勝感激��！ |
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yesucao
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2樓2012-06-07 10:59:36
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-18 13:37:11
yesucao: 金幣+2 2012-06-18 19:53:01
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yesucao: 金幣+2 2012-06-18 19:53:01
| 陽性對(duì)照一般是稀釋已知的DNA拷貝的純品，你的陽性對(duì)照沒有問題也說明你設(shè)計(jì)的探針也沒問題。但是你的處理組的樣品沒有明顯的擴(kuò)增曲線，很有可能是樣品中雜質(zhì)影響了擴(kuò)增反應(yīng)，因?yàn)闊晒舛縋CR對(duì)樣品的純度要求很高。不知道你設(shè)計(jì)的探針的效率怎么樣，你測(cè)過沒有？ |
6樓2012-06-18 01:23:30
哎呀那個(gè)雨
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7樓2015-07-30 19:03:42
永不言棄��！
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8樓2019-08-27 13:36:26
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