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[求助]
瓊脂糖克隆實(shí)驗(yàn) Soft Agar Colony Formation Assay 已有1人參與
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| 請教，Soft Agar Colony Formation Assay培養(yǎng)15天后，肉眼可見克隆團(tuán)，但不知道怎么拍照才算合格，問一下有沒有人做過？求交流 |
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你好，我想做軟瓊脂糖克隆實(shí)驗(yàn)，結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29. 我的步驟是這樣的：1：二次水配制 1.2%及 0.6% 低熔點(diǎn)瓊脂糖。 2：2X McCoy’s 5A 培養(yǎng)基，加入 20% FBS 及 2X 雙抗。 與 1.2% 低熔點(diǎn)瓊脂糖 1:1 混合，加入 1.4ml 于6孔板中，室溫放至凝固。 3：消化HT29細(xì)胞，計(jì)數(shù)為 10^4/ml 。2X培養(yǎng)基：0.6% 低熔點(diǎn)瓊脂糖=1：1， 取混合液 1 ml 與 100ul 細(xì)胞懸液混勻，加入上層。 4：37度，5% CO2 培養(yǎng)。 結(jié)果：a:上層瓊脂糖不凝固。 b:細(xì)胞不貼壁 c:細(xì)胞在第三天全死了 疑問：1：上層為什么不凝固呢？ 2：加入細(xì)胞時(shí)是先加入上層低熔點(diǎn)瓊脂糖再加細(xì)胞，還是細(xì)胞和上層低熔點(diǎn)瓊脂糖混勻后再加入上冊呢？ 3：步驟我的有哪里不對？求解！求指導(dǎo)！求指示！ 轉(zhuǎn)眼研三可是我這樣的實(shí)驗(yàn)都無從下手，求指導(dǎo)！萬謝！！ |
2樓2014-08-13 20:23:22
3樓2014-08-14 08:25:35
4樓2014-08-14 09:00:07
5樓2014-08-15 08:23:17
6樓2014-08-15 08:23:43
341176
金蟲 (正式寫手)
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7樓2019-05-24 10:17:12
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