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[求助]
瓊脂糖克隆實驗 Soft Agar Colony Formation Assay 已有1人參與
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| 請教，Soft Agar Colony Formation Assay培養(yǎng)15天后，肉眼可見克隆團，但不知道怎么拍照才算合格，問一下有沒有人做過？求交流 |
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4樓2014-08-14 09:00:07
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你好，我想做軟瓊脂糖克隆實驗，結腸癌細胞株HT29. 我的步驟是這樣的：1：二次水配制 1.2%及 0.6% 低熔點瓊脂糖。 2：2X McCoy’s 5A 培養(yǎng)基，加入 20% FBS 及 2X 雙抗。 與 1.2% 低熔點瓊脂糖 1:1 混合，加入 1.4ml 于6孔板中，室溫放至凝固。 3：消化HT29細胞，計數(shù)為 10^4/ml 。2X培養(yǎng)基：0.6% 低熔點瓊脂糖=1：1， 取混合液 1 ml 與 100ul 細胞懸液混勻，加入上層。 4：37度，5% CO2 培養(yǎng)。 結果：a:上層瓊脂糖不凝固。 b:細胞不貼壁 c:細胞在第三天全死了 疑問：1：上層為什么不凝固呢？ 2：加入細胞時是先加入上層低熔點瓊脂糖再加細胞，還是細胞和上層低熔點瓊脂糖混勻后再加入上冊呢？ 3：步驟我的有哪里不對？求解！求指導！求指示！ 轉眼研三可是我這樣的實驗都無從下手，求指導！萬謝��！ |
2樓2014-08-13 20:23:22
5樓2014-08-15 08:23:17
6樓2014-08-15 08:23:43
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