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[求助]
請教用過反相硅膠柱分離的高手
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我這個東西是正丁醇部分提取的東西，之前他們用大孔砍斷效果不好，到我這的時候就上LH-20試了下，效果不錯，但是那個上樣量太少了160g填料一次上樣不到2g，現(xiàn)在老師讓我換用反相，所以想請教哈有過使用經(jīng)驗的同仁們。 1.實驗室的填料都是前兩屆的師兄師姐用過的裝在一些小柱子里的，有幾根都已經(jīng)干了，這個會不會影響使用，怎么處理？而且，還有點臟，用甲醇反復洗嗎？ 2.填料和上樣量的比大概是多少，我這個有個麻煩的是填料都濕的了，質(zhì)量還不好計算。如果這樣可不可以按柱體積來 3.樣品上樣如何選擇是濕法還是干法上樣 有點羅嗦有點雜，謝謝大家了 |
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9樓2012-06-21 09:56:12
rose.no.9
木蟲 (著名寫手)
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2樓2012-06-20 16:45:41
【答案】應助回帖
★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
長白山的夢: 金幣+2, ★有幫助 2012-06-21 09:48:01
感謝參與，應助指數(shù) +1
長白山的夢: 金幣+2, ★有幫助 2012-06-21 09:48:01
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反相硅膠也叫ODS，用甲醇裝柱子，用甲醇-水做洗脫劑，開始用低濟度的甲醇，慢慢加大甲醇的量，最后用甲醇沖柱子，用甲醇保存就可以了 還可以用：1，推薦你使用HPLC試試。也是選用反向硅膠柱，流動相為乙腈-水或者是甲醇-水。這樣的分離效果和分離效率肯定比你自己裝柱子要高很多倍！而且你的樣品是黃酮類的天然產(chǎn)物，那么它的或是它這一類的化合物的HPLC分離條件文獻中可定有大量記載，你也有參考依據(jù)了！自己裝的反相硅膠柱酯適合于分離極性差別明顯的兩種或三種等樣品的分離，如果要分離物的種類很多的話，是沒有明顯效果。 2， 推薦你使用正相硅膠柱層析方法試試。原理和反向類似，只是出峰順序相反。個人覺得對你這種要分離的天然產(chǎn)物，正相硅膠柱層析較反向更有優(yōu)勢。而且天然產(chǎn)物的這種分離條件文獻中也要大量記載，你可以在參考的基礎(chǔ)上進行優(yōu)化。 1關(guān)于你說的反相硅膠柱用的應該不是中壓色譜系統(tǒng)而是就用了個泵在跑，那么就沒有紫外檢測，可以選擇跑柱同時點板檢測，所以先判斷你樣品有沒有顏色，如果有，在有顏色時接的瓶多一些。 2關(guān)于洗脫劑和梯度建議參考文獻 3上樣量一般比較純的話上樣量不大于 0.5g/120g 填料 |
3樓2012-06-20 17:13:26
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
長白山的夢: 金幣+12, ★★★★★最佳答案, 謝謝 2012-06-21 09:47:21
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1.實驗室的填料都是前兩屆的師兄師姐用過的裝在一些小柱子里的，有幾根都已經(jīng)干了，這個會不會影響使用，怎么處理？而且，還有點臟，用甲醇反復洗嗎？ 臟的把柱頭挖了吧��！挖出來的用來拌樣挺好。干了的多用甲醇沖沖。。也可以梯度沖，說不定能把臟東西沖出來，但是梯度不要跨太大。 2.填料和上樣量的比大概是多少，我這個有個麻煩的是填料都濕的了，質(zhì)量還不好計算。如果這樣可不可以按柱體積來 我25g ods最多上過600~800mg吧 3.樣品上樣如何選擇是濕法還是干法上樣 能用初始流動相最好了。。。用水更好，反正最好少加甲醇，有一次我用50%甲醇溶樣， 30%甲醇起始濃度，結(jié)果樣品一下子全部泄露了。。悲劇~ 但這和你樣品的性質(zhì)也有關(guān)系，某些樣品，如黃酮苷吧，我感覺50um的ods對其吸附能力就比較弱。。。。 實在水難容的就用臟的ods拌樣，舍不得的話就用硅藻土拌樣，硅藻土是別人教的，，，但是如果是加壓的話，記得中間一定要加個篩板，別吧硅藻土沖到柱子里了。。 也可以上面接一個超級小柱子，專門裝拌好的硅藻土和樣品，我就是這么干的。 |
4樓2012-06-20 21:56:03
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