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zld629木蟲 (小有名氣)
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[求助]
平末端連接,連上了,很多轉(zhuǎn)化子中沒有一個正確的,怎么辦?
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| 在構建一個載體到了最后一步平末端連接,總是不成功。轉(zhuǎn)化后長了不少菌,挑了100多那個,幾乎整板都挑了,沒有一個對的。怎么辦?我用載體上片段做正引物、插入片段末端做反引物,做PCR,連接液有很亮的帶,應該是有連上的了,為什么轉(zhuǎn)化子中卻沒有?如何解決這個問題呢? |
木蟲 (小有名氣)
木蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
| 先加A連接到t載體上,鑒定后酶切,再連接到目的載體上。實在不行試試In-Fusion克隆技術。http://wenku.baidu.com/view/5bb2f4a70029bd64783e2c60.html?st=1 |
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