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zld629木蟲 (小有名氣)
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[求助]
平末端連接，連上了，很多轉(zhuǎn)化子中沒有一個正確的，怎么辦？
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| 在構(gòu)建一個載體到了最后一步平末端連接，總是不成功。轉(zhuǎn)化后長了不少菌，挑了100多那個，幾乎整板都挑了，沒有一個對的。怎么辦？我用載體上片段做正引物、插入片段末端做反引物，做PCR，連接液有很亮的帶，應該是有連上的了，為什么轉(zhuǎn)化子中卻沒有？如何解決這個問題呢？ |
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zld629
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2樓2012-06-24 19:40:10
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3樓2012-06-25 00:25:52
【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
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| 先加A連接到t載體上，鑒定后酶切，再連接到目的載體上。實在不行試試In-Fusion克隆技術(shù)。http://wenku.baidu.com/view/5bb2f4a70029bd64783e2c60.html?st=1 |
4樓2012-06-25 11:25:27
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