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ZOEY21

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[求助] 膠回收產(chǎn)物連接后片段大小

酶切產(chǎn)物1%瓊脂糖凝膠電泳切膠回收200-1000bp片段，然后連了個(gè)接頭，再跑PCR擴(kuò)增后1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)竟然出現(xiàn)500-1800bp，這是怎么回事��？

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1樓 2012-06-26 14:01:13

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ZOEY21

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2樓: Originally posted by loveyjc at 2012-06-26 16:12:16
建議你瓊脂糖凝膠電泳切膠回收200-500bp片段，然后連了個(gè)接頭，再跑PCR擴(kuò)增后1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)看看，這時(shí)候差不多可以得到你需要的長(zhǎng)度！
另外，注意割膠時(shí)的操作！

謝謝！所以是我切膠的問(wèn)題嗎？我切膠時(shí)電泳跑的時(shí)間不短啊，Marker的2000和1000bp分的很清楚。關(guān)鍵是我想回收的范圍在200-1000bp。我跑PCR后出現(xiàn)1800多是不是說(shuō)明連接出問(wèn)題了��？

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3樓2012-06-26 16:27:39

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loveyjc

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【答案】應(yīng)助回帖

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ZOEY21: 金幣+2, ★有幫助 2012-06-26 16:24:52
小丹木木: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-06-26 16:46:52

建議你瓊脂糖凝膠電泳切膠回收200-500bp片段，然后連了個(gè)接頭，再跑PCR擴(kuò)增后1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)看看，這時(shí)候差不多可以得到你需要的長(zhǎng)度！
另外，注意割膠時(shí)的操作！

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2樓2012-06-26 16:12:16

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gaoyang636

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ZOEY21: 金幣+2, ★★★很有幫助 2012-06-27 08:23:56
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-06-27 13:37:14

小tips: 先跑膠，后染色，能讓片段大小被估計(jì)更準(zhǔn)一些；
注意電流不要過(guò)大，溫度過(guò)高也跑膠結(jié)果也有影響

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4樓2012-06-26 21:02:26

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引用回帖:

4樓: Originally posted by gaoyang636 at 2012-06-26 21:02:26
小tips: 先跑膠，后染色，能讓片段大小被估計(jì)更準(zhǔn)一些；
注意電流不要過(guò)大，溫度過(guò)高也跑膠結(jié)果也有影響

謝謝！不知道是什么原因，以為是連接體系有問(wèn)題。跑電泳是穩(wěn)壓120V，太高了嗎？今天調(diào)低再試試吧...

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5樓2012-06-27 08:25:54

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