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rainbow8新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的問(wèn)題！急�。�！大家請(qǐng)關(guān)注
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| 大家好，最近總是覺(jué)得質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母的轉(zhuǎn)化效率比較低，問(wèn)一下大家：加入多少感受態(tài)和質(zhì)粒？ 有文獻(xiàn)報(bào)道40ng感受態(tài)加小于100ng的質(zhì)粒，也有文獻(xiàn)報(bào)道65ng加小于1ug的質(zhì)粒，還有文獻(xiàn)報(bào)道加不超過(guò)2-3ug的質(zhì)粒。我試過(guò)前兩個(gè)，感覺(jué)都差不多，大家有沒(méi)有做這方面轉(zhuǎn)化效率高的參數(shù)，指導(dǎo)指導(dǎo)我，謝謝了�。�！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 正解，這些都很重要 2012-06-27 07:59:18
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小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 正解，這些都很重要 2012-06-27 07:59:18
| 雖然我的質(zhì)粒大概在1ug左右，但是我覺(jué)得這些數(shù)據(jù)全都不重要。電轉(zhuǎn)的成功與否完全取決于你對(duì)于操作的細(xì)節(jié)上的把握。比如電轉(zhuǎn)杯的前處理，比如冰浴，比如電轉(zhuǎn)電壓，比如電轉(zhuǎn)之后菌液的處理。這是我博士期間最大、最真實(shí)的感受。我到最后根本不看多少菌多少質(zhì)粒，但是做三次肯定可以出來(lái)兩次，只是單克隆多少的問(wèn)題。電轉(zhuǎn)絕對(duì)是細(xì)節(jié)決定成敗。 |
4樓2012-06-26 22:33:16
小丹木木
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2樓2012-06-26 16:43:22
rainbow8
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3樓2012-06-26 17:05:42
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-06-27 13:39:12
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-06-27 13:39:12
| 雖然電轉(zhuǎn)是使用儀器，效果好一點(diǎn)。我覺(jué)得沒(méi)有必要用電轉(zhuǎn)，普通的冷激轉(zhuǎn)化就行。以前我做轉(zhuǎn)化，也是不出結(jié)果，都是細(xì)節(jié)上的問(wèn)題。比如感受態(tài)細(xì)胞的好壞（購(gòu)買(mǎi)的好點(diǎn)兒），冷激時(shí)間的把握.......正如上面老兄說(shuō)的，細(xì)節(jié)決定著成敗，重復(fù)一定有收獲。 |
5樓2012-06-27 09:21:10
rainbow8
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6樓2012-06-27 19:19:34
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