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rainbow8新蟲 (小有名氣)
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酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的問題！急�。�！大家請(qǐng)關(guān)注
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| 大家好，最近總是覺得質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母的轉(zhuǎn)化效率比較低，問一下大家：加入多少感受態(tài)和質(zhì)粒？ 有文獻(xiàn)報(bào)道40ng感受態(tài)加小于100ng的質(zhì)粒，也有文獻(xiàn)報(bào)道65ng加小于1ug的質(zhì)粒，還有文獻(xiàn)報(bào)道加不超過2-3ug的質(zhì)粒。我試過前兩個(gè)，感覺都差不多，大家有沒有做這方面轉(zhuǎn)化效率高的參數(shù)，指導(dǎo)指導(dǎo)我，謝謝了�。。� |
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 【分子生物】EPI帖 |
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木蟲 (正式寫手)
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小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 正解，這些都很重要 2012-06-27 07:59:18
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小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 正解，這些都很重要 2012-06-27 07:59:18
| 雖然我的質(zhì)粒大概在1ug左右，但是我覺得這些數(shù)據(jù)全都不重要。電轉(zhuǎn)的成功與否完全取決于你對(duì)于操作的細(xì)節(jié)上的把握。比如電轉(zhuǎn)杯的前處理，比如冰浴，比如電轉(zhuǎn)電壓，比如電轉(zhuǎn)之后菌液的處理。這是我博士期間最大、最真實(shí)的感受。我到最后根本不看多少菌多少質(zhì)粒，但是做三次肯定可以出來兩次，只是單克隆多少的問題。電轉(zhuǎn)絕對(duì)是細(xì)節(jié)決定成敗。 |
4樓2012-06-26 22:33:16
小丹木木
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2樓2012-06-26 16:43:22
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-06-27 13:39:12
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-06-27 13:39:12
| 雖然電轉(zhuǎn)是使用儀器，效果好一點(diǎn)。我覺得沒有必要用電轉(zhuǎn)，普通的冷激轉(zhuǎn)化就行。以前我做轉(zhuǎn)化，也是不出結(jié)果，都是細(xì)節(jié)上的問題。比如感受態(tài)細(xì)胞的好壞（購買的好點(diǎn)兒），冷激時(shí)間的把握.......正如上面老兄說的，細(xì)節(jié)決定著成敗，重復(fù)一定有收獲。 |
5樓2012-06-27 09:21:10
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