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[求助]
陰離子交換柱穿透
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| 我的目標(biāo)蛋白 pI=6.3~6.5 使用緩沖溶液 5mM pH=7.5 Tris-HCl 通過陰離子交換柱，但是蛋白一點(diǎn)也沒有吸附上，全都沖下來了，曾經(jīng)使用過20mM pH=8.0 Tris-HCl 做緩沖溶液，還是吸附不住，柱子是新?lián)Q上的，不知道是什么問題造成的 |
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dshlove
木蟲 (正式寫手)
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cuipibird3樓2012-07-02 09:06:01
anyaxiong
鐵桿木蟲 (知名作家)
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| 你的目標(biāo)蛋白所處的溶液鹽濃度是不是過高了，一般理論上電導(dǎo)大于5mS/cm的話，鹽離子就會與目的蛋白競爭離子交換劑的帶點(diǎn)基團(tuán)，從而導(dǎo)致目的蛋白掛不上柱；還有一個(gè)可能的原因就是tris-HCl所使用的環(huán)境溫度要穩(wěn)定，它隨環(huán)境溫度的改變而改變，例如：4℃時(shí)緩沖液的pH＝8.4，則37℃時(shí)的pH＝7.4，所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制，室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃～4℃。 |
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2樓2012-06-30 10:22:28
4樓2012-07-03 09:25:20
5樓2012-07-03 09:27:11
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