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陰離子交換柱穿透
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| 我的目標(biāo)蛋白 pI=6.3~6.5 使用緩沖溶液 5mM pH=7.5 Tris-HCl 通過(guò)陰離子交換柱，但是蛋白一點(diǎn)也沒(méi)有吸附上，全都沖下來(lái)了，曾經(jīng)使用過(guò)20mM pH=8.0 Tris-HCl 做緩沖溶液，還是吸附不住，柱子是新?lián)Q上的，不知道是什么問(wèn)題造成的 |
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anyaxiong
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+3, 鼓勵(lì)發(fā)帖交流問(wèn)題。 2012-06-30 21:58:27
cuipibird: 金幣+20, ★★★★★最佳答案 2012-07-03 09:27:28
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| 你的目標(biāo)蛋白所處的溶液鹽濃度是不是過(guò)高了，一般理論上電導(dǎo)大于5mS/cm的話，鹽離子就會(huì)與目的蛋白競(jìng)爭(zhēng)離子交換劑的帶點(diǎn)基團(tuán)，從而導(dǎo)致目的蛋白掛不上柱；還有一個(gè)可能的原因就是tris-HCl所使用的環(huán)境溫度要穩(wěn)定，它隨環(huán)境溫度的改變而改變，例如：4℃時(shí)緩沖液的pH＝8.4，則37℃時(shí)的pH＝7.4，所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制，室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃～4℃。 |
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cuipibird
2樓2012-06-30 10:22:28
dshlove
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6樓2012-07-03 11:18:03
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7樓2012-07-03 16:02:34
8樓2012-07-05 08:51:48
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