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[求助]
陰離子交換柱穿透
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| 我的目標蛋白 pI=6.3~6.5 使用緩沖溶液 5mM pH=7.5 Tris-HCl 通過陰離子交換柱,但是蛋白一點也沒有吸附上,全都沖下來了,曾經(jīng)使用過20mM pH=8.0 Tris-HCl 做緩沖溶液,還是吸附不住,柱子是新?lián)Q上的,不知道是什么問題造成的 |
鐵桿木蟲 (知名作家)

鐵桿木蟲 (知名作家)
| 你的目標蛋白所處的溶液鹽濃度是不是過高了,一般理論上電導大于5mS/cm的話,鹽離子就會與目的蛋白競爭離子交換劑的帶點基團,從而導致目的蛋白掛不上柱;還有一個可能的原因就是tris-HCl所使用的環(huán)境溫度要穩(wěn)定,它隨環(huán)境溫度的改變而改變,例如:4℃時緩沖液的pH=8.4,則37℃時的pH=7.4,所以一定要在使用溫度下進行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。 |

木蟲 (正式寫手)
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