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陰離子交換柱穿透
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| 我的目標(biāo)蛋白 pI=6.3~6.5 使用緩沖溶液 5mM pH=7.5 Tris-HCl 通過陰離子交換柱,但是蛋白一點(diǎn)也沒有吸附上,全都沖下來了,曾經(jīng)使用過20mM pH=8.0 Tris-HCl 做緩沖溶液,還是吸附不住,柱子是新?lián)Q上的,不知道是什么問題造成的 |
鐵桿木蟲 (知名作家)
| 你的目標(biāo)蛋白所處的溶液鹽濃度是不是過高了,一般理論上電導(dǎo)大于5mS/cm的話,鹽離子就會(huì)與目的蛋白競(jìng)爭(zhēng)離子交換劑的帶點(diǎn)基團(tuán),從而導(dǎo)致目的蛋白掛不上柱;還有一個(gè)可能的原因就是tris-HCl所使用的環(huán)境溫度要穩(wěn)定,它隨環(huán)境溫度的改變而改變,例如:4℃時(shí)緩沖液的pH=8.4,則37℃時(shí)的pH=7.4,所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。 |

木蟲 (正式寫手)
木蟲 (正式寫手)
鐵桿木蟲 (知名作家)

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