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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 陰離子交換柱穿透
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[求助]
陰離子交換柱穿透
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| 我的目標蛋白 pI=6.3~6.5 使用緩沖溶液 5mM pH=7.5 Tris-HCl 通過陰離子交換柱，但是蛋白一點也沒有吸附上，全都沖下來了，曾經(jīng)使用過20mM pH=8.0 Tris-HCl 做緩沖溶液，還是吸附不住，柱子是新?lián)Q上的，不知道是什么問題造成的 |
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送鮮花一朵 
4樓2012-07-03 09:25:20
anyaxiong
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| 你的目標蛋白所處的溶液鹽濃度是不是過高了，一般理論上電導大于5mS/cm的話，鹽離子就會與目的蛋白競爭離子交換劑的帶點基團，從而導致目的蛋白掛不上柱；還有一個可能的原因就是tris-HCl所使用的環(huán)境溫度要穩(wěn)定，它隨環(huán)境溫度的改變而改變，例如：4℃時緩沖液的pH＝8.4，則37℃時的pH＝7.4，所以一定要在使用溫度下進行配制，室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃～4℃。 |
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2樓2012-06-30 10:22:28
dshlove
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3樓2012-07-02 09:06:01
5樓2012-07-03 09:27:11
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