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基因克隆
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我設(shè)計的一對引物，第一次PCR擴增時，發(fā)現(xiàn)擴增出來了片段，但個人感覺條帶太暗，怕回收不回來，就扔了。第二次做，同樣的體系，同樣的條件，P出來，連一條條帶都沒有。而且第一次的讓師兄看了，一點都不暗，說是能回收回來的。 請問各位，這是什么原因呢？為什么同樣的條件，同樣的體系，就是做不出來呢。 |
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3樓2012-07-03 12:22:42
Marado
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【答案】應(yīng)助回帖
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1：第一次P出了條帶，請問是就目的條帶一條呢，還是有多條條帶，如果多條說明引物的特異性不是很好，需要摸條件，如果第一次就P出了一條且是目的條帶的話，只是有點暗的話，可以試著加大模板量，增加PCR循環(huán)數(shù). 2：最好對模板進行檢測，看看是否污染或者濃度是否足夠，酶，引物，buff，水之類的東西也得確保沒有污染，這些都會不經(jīng)意中影響PCR，可以一一排除. 祝樓主好運  |
2樓2012-07-03 10:20:26
Marado
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4樓2012-07-03 13:14:49
sd3824289
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5樓2012-07-03 15:44:06
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