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基因克隆
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我設(shè)計(jì)的一對(duì)引物，第一次PCR擴(kuò)增時(shí)，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增出來了片段，但個(gè)人感覺條帶太暗，怕回收不回來，就扔了。第二次做，同樣的體系，同樣的條件，P出來，連一條條帶都沒有。而且第一次的讓師兄看了，一點(diǎn)都不暗，說是能回收回來的。 請(qǐng)問各位，這是什么原因呢？為什么同樣的條件，同樣的體系，就是做不出來呢。 |
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sd3824289
木蟲 (正式寫手)
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5樓2012-07-03 15:44:06
Marado
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-07-03 15:31:22
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hraikeyan: 金幣+2 2012-07-25 11:20:09
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1：第一次P出了條帶，請(qǐng)問是就目的條帶一條呢，還是有多條條帶，如果多條說明引物的特異性不是很好，需要摸條件，如果第一次就P出了一條且是目的條帶的話，只是有點(diǎn)暗的話，可以試著加大模板量，增加PCR循環(huán)數(shù). 2：最好對(duì)模板進(jìn)行檢測(cè)，看看是否污染或者濃度是否足夠，酶，引物，buff，水之類的東西也得確保沒有污染，這些都會(huì)不經(jīng)意中影響PCR，可以一一排除. 祝樓主好運(yùn)  |
2樓2012-07-03 10:20:26
3樓2012-07-03 12:22:42
Marado
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4樓2012-07-03 13:14:49
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