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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 基因克隆
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[求助]
基因克隆
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我設計的一對引物，第一次PCR擴增時，發(fā)現(xiàn)擴增出來了片段，但個人感覺條帶太暗，怕回收不回來，就扔了。第二次做，同樣的體系，同樣的條件，P出來，連一條條帶都沒有。而且第一次的讓師兄看了，一點都不暗，說是能回收回來的。 請問各位，這是什么原因呢？為什么同樣的條件，同樣的體系，就是做不出來呢。 |
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2樓2012-07-03 10:20:26
3樓2012-07-03 12:22:42
Marado
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4樓2012-07-03 13:14:49
sd3824289
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5樓2012-07-03 15:44:06
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雅典娜1008
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7樓2012-07-03 17:10:51
kaikal
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8樓2012-07-04 07:23:14
9樓2012-07-04 22:46:51
【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數 +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應助 2012-07-05 13:45:27
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應助 2012-07-05 13:45:27
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條帶比較暗的原因，很可能是這兩個：其一，引物特異性不好，如果設計的引物特異性很好的話，一般p出來的條帶是很亮很亮的，不會覺得很暗；其二，模板濃度很低很低，這樣的話，p出來的條帶也會感覺很暗；解決方法有兩個： 其一：把模板跑個電泳看看有無污染和查看模板濃度，如果出現(xiàn)的條帶很暗，建議將模板濃縮下，再做pcr；其二，檢查完模板沒有問題的情況下，重新設計引物，將引物特異性提高，同時適當改變反應條件，p出來條帶會很亮的，pcr 反應條件應該用 DNATap 聚合酶。 祝實驗順利~ |
10樓2012-07-05 09:57:35
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