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我設(shè)計(jì)的一對(duì)引物，第一次PCR擴(kuò)增時(shí)，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增出來(lái)了片段，但個(gè)人感覺(jué)條帶太暗，怕回收不回來(lái)，就扔了。第二次做，同樣的體系，同樣的條件，P出來(lái)，連一條條帶都沒(méi)有。而且第一次的讓師兄看了，一點(diǎn)都不暗，說(shuō)是能回收回來(lái)的。 請(qǐng)問(wèn)各位，這是什么原因呢？為什么同樣的條件，同樣的體系，就是做不出來(lái)呢。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-07-04 13:42:58
hraikeyan: 金幣+3 2012-07-25 11:20:30
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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hraikeyan: 金幣+3 2012-07-25 11:20:30
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我覺(jué)得樓主做個(gè)溫度梯度怎么樣，實(shí)驗(yàn)這東西本來(lái)就存在著很大的偶然性的，摸索一下條件 其次看看你的引物或體系條件有沒(méi)有出現(xiàn)問(wèn)題，我想問(wèn)下你用什么酶擴(kuò)的？ 還有就是你如果帶不亮的話，可以先回收，以回收的產(chǎn)物為模板，進(jìn)行擴(kuò)增，也可以做個(gè)嵌式PCR，這樣有可能效果會(huì)好些！ |
8樓2012-07-04 07:23:14
Marado
金蟲(chóng) (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-07-03 15:31:22
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-07-03 15:31:22
hraikeyan: 金幣+2 2012-07-25 11:20:09
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1：第一次P出了條帶，請(qǐng)問(wèn)是就目的條帶一條呢，還是有多條條帶，如果多條說(shuō)明引物的特異性不是很好，需要摸條件，如果第一次就P出了一條且是目的條帶的話，只是有點(diǎn)暗的話，可以試著加大模板量，增加PCR循環(huán)數(shù). 2：最好對(duì)模板進(jìn)行檢測(cè)，看看是否污染或者濃度是否足夠，酶，引物，buff，水之類的東西也得確保沒(méi)有污染，這些都會(huì)不經(jīng)意中影響PCR，可以一一排除. 祝樓主好運(yùn)  |
2樓2012-07-03 10:20:26
3樓2012-07-03 12:22:42
Marado
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4樓2012-07-03 13:14:49
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