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[求助]
Q柱堵了，該怎么樣清洗
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| 大家好，我最近用Q柱純化蛋白，剛開(kāi)始上樣時(shí)沒(méi)有問(wèn)題，用完用Nacl洗時(shí)剛開(kāi)始也沒(méi)什么問(wèn)題，可是過(guò)完20%乙醇后開(kāi)始有點(diǎn)堵，后來(lái)用了2次后，Q柱開(kāi)始非常堵，上樣都沒(méi)辦法進(jìn)行，各位大俠支支招，什么清洗方法比較好？急用，先行謝過(guò)哈 O(∩_∩)O~ |
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9樓2012-07-16 10:48:24
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【答案】應(yīng)助回帖
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| Q柱是強(qiáng)陰離子交換層析柱，如果是預(yù)裝柱，應(yīng)該有說(shuō)明書(shū)的，如果按照說(shuō)明書(shū)做還不行，那就只能硬來(lái)切開(kāi)重裝到別的空柱里了。不過(guò)也有可能也是不行的，因?yàn)樘盍蟽?nèi)部堵住了就很難清洗。難道你的樣品沒(méi)有用0.2微米的濾膜過(guò)濾？所有的溶液都沒(méi)有用0.45微米的濾膜過(guò)濾？ |
2樓2012-07-04 21:54:09
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【答案】應(yīng)助回帖
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看天: 金幣+3, BioEPI+1, 授予 2012-07-05 13:39:25
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首先得確定你i是什么東西堵住了，按照你的介紹來(lái)看，很有可能是蛋白堵柱子了。給你個(gè)清洗方案，參考下。 1． 日常清洗 每次使用后，先用2 – 5 個(gè)柱體積的100% B（其中需含1M鹽如NaCl）清洗柱子，再用純水平衡柱子3 – 5柱個(gè)體積。 2． 每月清洗（使用10次左右，柱子的壓力上升，分辨率下降時(shí)） 0.3M NaOH 充滿一個(gè)柱體積，室溫放置3-5個(gè)小時(shí)，再用純水平衡3-5個(gè)柱體積。 3． 季度清洗（每月保養(yǎng)進(jìn)行了3次左右，且按照每月保養(yǎng)操作后效果不明顯時(shí)） Inject 2 ml 1 M NaCl溶液，用純水沖洗5個(gè)體積直至UV沖平. Inject 2 ml 1 M NaOH溶液，用純水沖洗5個(gè)體積直至UV沖平 Inject 2 ml 1 M NaCl溶液，用純水沖洗5個(gè)體積直至UV沖平 Inject 2 ml 1 M HCl溶液，用純水沖洗5個(gè)體積直至UV沖平 Inject 2 ml 75% 乙酸，用純水沖洗5個(gè)體積直至UV沖平 Inject 5 ml 1 M NaCl溶液，用純水沖洗5個(gè)體積直至UV沖平 4.強(qiáng)力清洗（半年或一年） ⑴.親水性蛋白和多肽 用溶有去污劑的溶液（例：含0.2%Triton的緩沖液）以較慢的流速過(guò)夜清洗柱子，用純水沖凈 用1M NaOH 流速0.8 ml/min 過(guò)夜清洗，用純水沖凈，再用2M NaCl 洗脫雜蛋白，用純水沖凈， 10% DMSO(二甲基亞砜)過(guò)夜清洗，用純水沖凈，再用2M NaCl 洗脫雜蛋白，用純水沖凈 30%乙酸 流速0.8ml/min 過(guò)夜清洗 如用以上步驟清洗后柱子性能仍然沒(méi)有恢復(fù)，可用50mM Tris pH 7.5，10mM CaCl2， 0.1mg/ml Proteinase K溶液室溫過(guò)夜或37℃ 1h清洗 ⑵ .核酸 通常用10 mM Tris-HCl,1mM EDTA, pH 8.0 以低流速過(guò)夜溶解沉淀的核酸 ①.RNA Inject 一個(gè)柱體積的0.5 M NaOH放置1h，用純水沖凈，一個(gè)柱體積的3 M KCl清洗，用純水沖凈，inject 40 ml 0.1mg/ml RnaseI 0.1 M NaCl, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5,37℃放置2h,用10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0沖凈，再用一個(gè)柱體積的3 M KCl清洗，用純水沖凈。 ②.DNA Inject一個(gè)柱體積的0.5 M HCl放置2h，用純水沖凈，Inject一個(gè)柱體積的0.5 M NaOH放置1h，用純水沖凈，一個(gè)柱體積的3 M KCl清洗，用純水沖凈，inject 40 ml 0.1mg/ml DnaseI 0.1 M NaCl, 10 mM MgCl2 50 mM Tris-HCl, pH 7.5,37℃放置2h, 用10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0沖凈，再用一個(gè)柱體積的3 M KCl清洗，用純水沖凈。 ⑷.脂類(lèi) 在中性或酸性溶液中加入去污劑（例：含0.2%Triton的緩沖液），流速0.8ml/min過(guò)夜清洗，然后用100%乙醇洗凈去污劑，再用純水沖凈。 |
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