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Western Blot出現(xiàn)問題 已有1人參與
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最近Western blot做不出結(jié)果,希望大家多多指教 目的蛋白大小20kD左右,跑SDS可以看到,轉(zhuǎn)膜后也可以看到,但是ECL顯色后沒有條帶,只有白的亮的一片,而且也不清楚這些亮的一片到底是化學發(fā)光還是其他什么東西,各位高手有沒有遇到這種情況,希望能給些好的建議 |
【分子生物】EPI帖 |

新蟲 (小有名氣)
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不知道你所謂的轉(zhuǎn)膜后也可以看到是什么意思?是通過CBB外其他染色看的嗎? 首先確認一下自己的ECL化學發(fā)光操作步驟是否正確。ECL混合后,膜孵育的時間是多久?因為ECL發(fā)光強度是一個峰值曲線,過早或過完曝光都不合適。曝光時間可以控制在5-30min之間(排除膜孵育的5min)。 然后請問你是否將光圈全開,曝光時間是多久? 樓主應該是positive成像的吧?即背景是黑色,目的條帶為白色。 如果是這樣的話,全亮的區(qū)域可能有目標條帶,可能是由于濃度過高或者曝光時間過久造成的。我就遇到過濃度過高的情況,一塊白,而且ECL之后條帶部位都有明顯的棕黃燒焦的顏色。 |
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