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最近Western blot做不出結(jié)果，希望大家多多指教 目的蛋白大小20kD左右，跑SDS可以看到，轉(zhuǎn)膜后也可以看到，但是ECL顯色后沒(méi)有條帶，只有白的亮的一片，而且也不清楚這些亮的一片到底是化學(xué)發(fā)光還是其他什么東西，各位高手有沒(méi)有遇到這種情況，希望能給些好的建議 |
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tiger234
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9樓2012-07-10 00:53:21
jacky1985310
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jl860822: 金幣+2, ★★★很有幫助 2012-07-09 22:12:22
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不知道你所謂的轉(zhuǎn)膜后也可以看到是什么意思？是通過(guò)CBB外其他染色看的嗎？ 首先確認(rèn)一下自己的ECL化學(xué)發(fā)光操作步驟是否正確。ECL混合后，膜孵育的時(shí)間是多久？因?yàn)镋CL發(fā)光強(qiáng)度是一個(gè)峰值曲線(xiàn)，過(guò)早或過(guò)完曝光都不合適。曝光時(shí)間可以控制在5-30min之間（排除膜孵育的5min）。 然后請(qǐng)問(wèn)你是否將光圈全開(kāi)，曝光時(shí)間是多久？ 樓主應(yīng)該是positive成像的吧？即背景是黑色，目的條帶為白色。 如果是這樣的話(huà)，全亮的區(qū)域可能有目標(biāo)條帶，可能是由于濃度過(guò)高或者曝光時(shí)間過(guò)久造成的。我就遇到過(guò)濃度過(guò)高的情況，一塊白，而且ECL之后條帶部位都有明顯的棕黃燒焦的顏色。 |
2樓2012-07-06 12:17:04
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