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histoday新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR擴(kuò)增融合基因
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| 新手：一個(gè)新的融合基因，想把它的全長(zhǎng)擴(kuò)出來，大約2000多kb,已經(jīng)試過很多次，都沒有結(jié)果。想聽聽大家的意見。比如用什么酶比較好？我用過普通taq酶，La taq酶，platinum，也重新設(shè)計(jì)過多次引物，但還是不行，想請(qǐng)教一下大家，謝謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 很熱心的蟲蟲哦 2012-07-11 13:38:00
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小丹木木: 金幣+3, 很熱心的蟲蟲哦 2012-07-11 13:38:00
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有幾個(gè)可能的原因： 1.酶的問題，采用延伸能力比較強(qiáng)的酶 2.引物問題，看看引物之間以及本身的配對(duì)堿基情況 3.模板問題，GC含量高或者產(chǎn)生內(nèi)部形成復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)，考慮使用GC buffer以及擴(kuò)增體系中加入甘油等物質(zhì) 4.退火溫度過低或者循環(huán)數(shù)偏少，提高退火溫度以及加大循環(huán)數(shù) |
9樓2012-07-09 08:41:20
10樓2012-07-09 08:44:46
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