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楊文心木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
請(qǐng)教硫酸咔唑法測(cè)糖含量中的原理以及換算因素？
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各位蟲(chóng)友，請(qǐng)教大家一個(gè)問(wèn)題，我最近要用到硫酸咔唑法測(cè)一個(gè)酸性多糖的糖含量，對(duì)于這個(gè)方法的原理以及計(jì)算方法有些不明白，希望能得到各位賜教。 1.原理問(wèn)題 我查看文獻(xiàn)有其原理有兩種說(shuō)法，一說(shuō)是多糖在硫酸作用下水解成含糖醛酸結(jié)構(gòu)的單糖，然后糖醛酸與咔唑反應(yīng)生成紫紅色的化合物，其在~530nm處有吸收，可通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)其吸收值，進(jìn)而計(jì)算多糖含量。 另一說(shuō)法是多糖在硫酸作用下先水解成單糖，單糖再次分解成糠醛，糠醛與咔唑反應(yīng)生成紫紅色的化合物，其在~530nm處有吸收，可通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)其吸收值，進(jìn)而計(jì)算多糖含量。 對(duì)于其原理，不知哪種說(shuō)法是準(zhǔn)確的，希望有懂這個(gè)的可以告知一聲。 2.換算因素問(wèn)題 在用硫酸咔唑法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，文獻(xiàn)多用的是葡萄糖醛酸溶液而非純的多糖當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品，但是供試品卻是多糖，這中間應(yīng)該存在一個(gè)換算因素F，可是這個(gè)換算因素F的計(jì)算，并沒(méi)有查到哪篇文獻(xiàn)講得很清楚，個(gè)人理解是，用硫酸咔唑法測(cè)多糖吸光度A530nm，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算的結(jié)果應(yīng)該是葡萄糖醛酸的含量，再除以葡萄糖醛酸占多糖中的質(zhì)量比即是多糖的含量，不知我的理解是否正確？ 舉例：如我要測(cè)一個(gè)多糖heparosan的含量（結(jié)構(gòu)見(jiàn)下圖），文獻(xiàn)報(bào)道其二糖分子量為392.9，已知葡萄糖醛酸的分子量為194.14那么它的換算因素 F=1/(194.14/392.9)，不知道我的算法是否正確，求指教！ Repeating disaccharide unit of heparosan |
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銅蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiaoxiao270: 金幣+2, 3Q 2012-07-12 20:47:57
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiaoxiao270: 金幣+2, 3Q 2012-07-12 20:47:57
| 我覺(jué)得是偏向第二種原理，水解成單糖的同時(shí)被硫酸氧化成糠醛，糠醛再和咔唑綜合成有色物質(zhì)，這種綜合類(lèi)似于酚醛綜合。對(duì)于換算因子，覺(jué)得不是你說(shuō)的那樣，試想，如果是你說(shuō)的那樣，如果測(cè)定多糖的濃度如果不知道分子量那豈不是測(cè)不出來(lái)了？所以在這里，可以看原理，既然原理都說(shuō)已經(jīng)水解成單糖了，那你的供試品就算不是單糖也變成了單糖，只是有些糖水解后的單糖不只是葡萄糖或是別的單糖，至于不同的單糖氧化后再綜合成有色物質(zhì)，這里的差別沒(méi)有考查過(guò)，但我想差別不大。 |
2樓2012-07-11 21:49:20
楊文心
木蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
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- 蟲(chóng)號(hào): 1101339
- 注冊(cè): 2010-09-17
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 藥物化學(xué)
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有一個(gè)疑惑，問(wèn)一下硫酸-苯酚法和硫酸-咔唑法測(cè)糖含量的區(qū)別？ 文獻(xiàn)報(bào)道說(shuō)硫酸-苯酚法是測(cè)總糖含量，也即酸性+中性+堿性糖 含量，而硫酸-咔唑法測(cè)得是酸性糖的含量，不知道具體反映在原理上是什么區(qū)別？ 我有一個(gè)猜想是，酸性糖中有糖醛酸結(jié)構(gòu)，用硫酸-咔唑法測(cè)的時(shí)候酸性多糖在濃硫酸作用下水解成帶有糖醛酸結(jié)構(gòu)的糠醛，此糠醛能與咔唑反應(yīng)生成紫紅色化合物而顯色，如果是這個(gè)原理的話，那么多糖中其它不含糖醛酸結(jié)構(gòu)的糖類(lèi)在這個(gè)分析中是不反應(yīng)出來(lái)的，也即硫酸咔唑法只測(cè)多糖中的酸性糖部分。因而，同樣的多糖，用硫酸-苯酚法測(cè)出來(lái)的結(jié)果往往會(huì)比用硫酸-咔唑法測(cè)出來(lái)的結(jié)果偏大些。 這個(gè)猜想中也有一個(gè)比較模糊的地方不太清楚，就是所謂只測(cè)酸性糖部分，是指多糖中的酸性多糖部分結(jié)構(gòu)里面的具體酸性單糖成分，還是指多糖中有酸性多糖和中性多糖，但是測(cè)的是酸性多糖整體�；氐轿疑厦婺莻�(gè)多糖結(jié)構(gòu)來(lái)說(shuō)，也即硫酸-咔唑法測(cè)得是那個(gè)結(jié)構(gòu)片段里面的左半部分，還是整體的。這是有區(qū)別的。 至于你說(shuō)的兩部分在硫酸作用下最后都水解成了糠醛，應(yīng)該是測(cè)的整體的糖含量，但是我覺(jué)得有一個(gè)可能性是水解生產(chǎn)的糠醛部分中那個(gè)-R基團(tuán)可能不太一樣，左半部分糠醛上的-R基團(tuán)可能帶有-COOH，而右半部分糠醛上的-R基團(tuán)上沒(méi)有-COOH，因而可能真正與咔唑起顏色反應(yīng)的只有帶-COOH部分的那個(gè)糖 ，也即硫酸-咔唑法測(cè)得的結(jié)果應(yīng)該是該多糖中的葡萄糖醛酸部分而不是整個(gè)多糖的含量了，那么整個(gè)多糖的含量實(shí)際上應(yīng)該比測(cè)得值更大，也即是測(cè)得的糖醛酸的含量除于糖醛酸占多糖中的比例。 當(dāng)然，如果是另外一種情況的話，也即酸性糖整體都參與了反應(yīng)，跟帶不帶-COOH無(wú)關(guān)的話，那么酸性多糖的含量就可以粗略的近似等于所測(cè)得的葡萄糖醛酸的含量了。 呵呵…我也不知到哪種可能是正確的，猜測(cè)而已。 |
3樓2012-07-12 19:21:54
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