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wy135033405木蟲 (小有名氣)
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[求助]
無模板pcr合成短片段 一直失敗
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在下需要合成的片段為107bp，為了節(jié)省開支，設計了6條短引物，以數字大致表示如下（一條鏈的5' 端為起點，互補鏈也從該方向計數，加' 表示）： p1: 1-30 p2：15'-45' p3: 31-60 p4: 46'-75' p5: 60-90 p6: 76'-107' 如圖 6條引物去除重疊部分可以拼湊成目的片段，目前使用多種酶、體系、反應條件均無法p出目的片段，在不重新設計引物的條件下，請大家提供些意見。本帖只為求助，如果確實通過您的方案做出結果，另贈100金幣，絕不食言。 圖示 |
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wy135033405
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| 可以考慮先加入三段進行PCR15個循環(huán)，然后再加入后三段引物進行PCR30循環(huán)，我之前試過這樣做，希望可以給予你幫助。 |
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3樓2012-07-16 19:06:30
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P1，P6 濃度10P,作為PCR體系的兩端引物，分別取1ul P2，P3，P4，P5 混在一起，混合物中每條的濃度1p, 取1ul,作為模板 退火溫度55C, 30個循環(huán) |
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