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wy135033405木蟲 (小有名氣)
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[求助]
無模板pcr合成短片段 一直失敗
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在下需要合成的片段為107bp，為了節(jié)省開支，設(shè)計了6條短引物，以數(shù)字大致表示如下（一條鏈的5' 端為起點，互補(bǔ)鏈也從該方向計數(shù)，加' 表示）： p1: 1-30 p2：15'-45' p3: 31-60 p4: 46'-75' p5: 60-90 p6: 76'-107' 如圖 6條引物去除重疊部分可以拼湊成目的片段，目前使用多種酶、體系、反應(yīng)條件均無法p出目的片段，在不重新設(shè)計引物的條件下，請大家提供些意見。本帖只為求助，如果確實通過您的方案做出結(jié)果，另贈100金幣，絕不食言。 圖示 |
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wy135033405
木蟲 (小有名氣)
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4樓2012-07-16 20:41:16
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2樓2012-07-16 17:10:17
【答案】應(yīng)助回帖
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wy135033405: 金幣+5, ★有幫助 2012-07-17 11:34:33
| 可以考慮先加入三段進(jìn)行PCR15個循環(huán)，然后再加入后三段引物進(jìn)行PCR30循環(huán)，我之前試過這樣做，希望可以給予你幫助。 |
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3樓2012-07-16 19:06:30
wy135033405
木蟲 (小有名氣)
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5樓2012-07-16 20:42:59
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