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yijunliu銀蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
短基因片段合成的相關(guān)問(wèn)題求助
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各位蟲(chóng)友，大家好。最近在做一個(gè)基因，由于沒(méi)有模板，只能去生物公司合成。我的基因片段一共69bp，加上兩端的酶切位點(diǎn)一共是81bp。咨詢過(guò)生物公司的負(fù)責(zé)人，他們說(shuō)如果按照一般合成基因的程序，先把目的基因合成到質(zhì)粒里面，把質(zhì)粒寄給我們，我們?cè)龠M(jìn)行雙酶切和膠回收基因酶切片段，再與自己的質(zhì)粒酶連。對(duì)于我這樣的小片段基因不容易做。他們提出建議：這么短的基因，可以直接合成兩條長(zhǎng)鏈，然后寄給我們，由我們自己退火，這樣的話退火后直接和酶切好的自己的質(zhì)粒連接就行了。 我想問(wèn)問(wèn)大家，這樣做出來(lái)的基因可以直接當(dāng)做是已經(jīng)雙酶切過(guò)的基因與我們自己已雙酶切過(guò)的質(zhì)粒酶連嗎？還有，自己退火的話，溫度，時(shí)間等條件應(yīng)該怎么判定呢。 第一次接觸這方面，請(qǐng)大家多多指導(dǎo)��！十分感謝�。。�！ |
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2樓2012-05-31 20:10:41
yijunliu
銀蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2012-06-03 11:17:10
【答案】應(yīng)助回帖
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yijunliu: 金幣+10, ★★★很有幫助 2012-06-05 18:11:47
yijunliu: 金幣+10, ★★★很有幫助 2012-06-05 18:11:47
| 公司說(shuō)的沒(méi)錯(cuò)，直接合成兩條鏈，然后退火就會(huì)成一條鏈，最后直接和載體連接，沒(méi)問(wèn)題的。退火的時(shí)候需要一個(gè)緩沖液（100mM NaCl ，50mM Hepes）退火條件：94度4min，70度10min，37度，20min。-20度保存。我特意查了一下實(shí)驗(yàn)記錄，呵呵，祝好運(yùn)！ |
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yijunliu4樓2012-06-05 11:17:46
yijunliu
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5樓2012-06-05 18:10:42
suanniunaizz
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