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77638333金蟲 (著名寫手)
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[求助]
請問Real time q PCR一定要做融解曲線嗎？
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chenguestc
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
77638333: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝。qPCR參數(shù)已經(jīng)有了。融解曲線的protocols能否詳細(xì)一些？ 2012-08-01 22:25:14
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 鼓勵(lì)積極熱心的幫忙解答問題 2012-08-02 15:29:35
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
77638333: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝。qPCR參數(shù)已經(jīng)有了。融解曲線的protocols能否詳細(xì)一些？ 2012-08-01 22:25:14
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 鼓勵(lì)積極熱心的幫忙解答問題 2012-08-02 15:29:35
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是的。溶解曲線是必須做的。 我們常用到的qPCR supplies 及用量（1個(gè)反應(yīng)，20ul體系）如下，樓主可根據(jù)這個(gè)用量適量調(diào)整： TBSYBRmix 10 ul PrimerF (10uM) 0.6 ul PrimerFR (10uM) 0.6 ul cDNA (20ng/ul) 2 ul Reference dye 0.4 ul ddH2O 6.4 ul PCR條件： 95度 1min 40x 95度 15s 60度 45s 最后，melt curve 95度 15s 60度 45s 95度 15s 可適當(dāng)調(diào)整。 |
2樓2012-08-01 22:10:17
chenguestc
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-08-02 15:29:49
77638333: 金幣+1, ★有幫助, 謝謝啦 2012-08-02 17:04:15
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溶解曲線只是PCR儀的其中之一的功能，我在做PCR時(shí)有的會用到，有的不需要做，看你做什么實(shí)驗(yàn)。分享下我的PROTOCOLS: 預(yù)變性： 95℃ 5min *1 PCR ： 95℃ 10s 60℃ 15s *50 72℃ 25s HRM ： 95℃ 1min 40℃ 1min *1 65℃ 1s 95℃ 檢測熒光 COOLING: 40℃ 10S 希望對你有幫助��！ |
4樓2012-08-02 09:37:38
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