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wangning__木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
為什么PCR擴(kuò)增出來(lái)使這個(gè)樣子，各位高手幫忙支招吧！
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古菌槽式擴(kuò)增，以全長(zhǎng)的50，100，150，200稀釋為模版，得到下面的圖，為什么有雜帶，后來(lái)提高退火溫度2℃，4℃，延伸時(shí)間縮短15s，20s，還是這個(gè)樣子，換了新的體系試劑還是沒(méi)有消除，這是什么原因呢？ PS：引物為109/1510;109/515，擴(kuò)增產(chǎn)物用于DGGE 求求各位大俠給支個(gè)招吧，小妹實(shí)在是找不出原因了。 2000的marker,分別為全長(zhǎng)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋50倍，100，150，200倍，其它條件一致 |
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2樓2012-08-04 14:33:48
robert-RBT
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3樓2012-08-04 21:18:12
eagles123
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4樓2012-08-04 22:00:14
snzydong
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wangning__5樓2012-08-05 09:08:48
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6樓2012-08-05 09:24:01
wangning__
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7樓2012-08-05 09:26:59
dajiong
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8樓2012-08-05 21:18:51
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9樓2012-08-06 16:31:40
sd3824289
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-08-07 15:37:57
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-08-07 15:37:57
| 建議樓主做個(gè)溫度梯度試試，我篩選條件的時(shí)候都是用這個(gè)方法，很好的！基本上做一次就知道最適退火溫度了，一般情況下，如果兩次PCR用到得酶不一樣，也會(huì)導(dǎo)致在相同的退火溫度下得到不一樣的結(jié)果！模板濃度如果高，建議加0.5μl就夠了，如果濃度不高，就得加1μL，引物濃度應(yīng)該都是10MM！祝樓主好運(yùn)！ |
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10樓2012-08-07 09:26:53
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