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wangning__木蟲 (正式寫手)
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[求助]
為什么PCR擴增出來使這個樣子，各位高手幫忙支招吧！
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古菌槽式擴增，以全長的50，100，150，200稀釋為模版，得到下面的圖，為什么有雜帶，后來提高退火溫度2℃，4℃，延伸時間縮短15s，20s，還是這個樣子，換了新的體系試劑還是沒有消除，這是什么原因呢？ PS：引物為109/1510;109/515，擴增產(chǎn)物用于DGGE 求求各位大俠給支個招吧，小妹實在是找不出原因了。 2000的marker,分別為全長擴增產(chǎn)物稀釋50倍，100，150，200倍，其它條件一致 |
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2樓2012-08-04 14:33:48
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3樓2012-08-04 21:18:12
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4樓2012-08-04 22:00:14
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wangning__5樓2012-08-05 09:08:48
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8樓2012-08-05 21:18:51
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9樓2012-08-06 16:31:40
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-08-07 15:37:57
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-08-07 15:37:57
| 建議樓主做個溫度梯度試試，我篩選條件的時候都是用這個方法，很好的！基本上做一次就知道最適退火溫度了，一般情況下，如果兩次PCR用到得酶不一樣，也會導(dǎo)致在相同的退火溫度下得到不一樣的結(jié)果！模板濃度如果高，建議加0.5μl就夠了，如果濃度不高，就得加1μL，引物濃度應(yīng)該都是10MM！祝樓主好運！ |
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10樓2012-08-07 09:26:53
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