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酵母提取基因組有幾步不懂,求各位幫忙!!!
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蝸牛酶反復(fù)凍融法提取酵母基因組 1 收集過夜培養(yǎng)16~18h 的菌體1.5mL,加入500μLPBS 溶液重懸菌體,12000r/min 離心2min,用PBS 重洗一次 2 將沉淀溶于35μL 的蝸牛酶溶液中,加入65μL的PBS,45℃作用2h,加100μL 裂解液,- 20℃冷凍,然后室溫振蕩溶解,反復(fù)3 次 3 向懸浮液中加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)輕輕混勻,然后10000r/min 離心5min. 4 取上清液,加入兩倍體積的無水乙醇,輕輕混勻,室溫放置5min; 5 12000r/min 離心10min,將沉淀溶解在100μL TE 中;加入等體積的酚- 氯仿- 異戊醇(體積比25:24:1),輕柔顛倒混勻,12000r/min 離心5min, 6 重復(fù)抽提1 次 7 ,加1/10 體積的3mol/L 醋酸鈉(pH5.2),2.5 倍體積的無水乙醇,- 20℃放置30min; 8 10000r/min離心5min,棄上清液,用70% 乙醇溶液洗滌沉淀兩次。 9 室溫干燥后用20μL TE 溶解;加入0.5μL 10mg/mL 的RNaseA,37℃溫浴30min,自然冷卻后保存 求解:其中第三步加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)和第四步加入兩倍體積的無水乙醇的作用是什么? |
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