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fanwww12鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
酵母提取基因組有幾步不懂，求各位幫忙�。�！
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蝸牛酶反復(fù)凍融法提取酵母基因組 1 收集過夜培養(yǎng)16～18h 的菌體1.5mL，加入500μLPBS 溶液重懸菌體，12000r/min 離心2min，用PBS 重洗一次 2 將沉淀溶于35μL 的蝸牛酶溶液中，加入65μL的PBS，45℃作用2h，加100μL 裂解液，－ 20℃冷凍，然后室溫振蕩溶解，反復(fù)3 次 3 向懸浮液中加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)輕輕混勻，然后10000r/min 離心5min. 4 取上清液，加入兩倍體積的無水乙醇，輕輕混勻，室溫放置5min； 5 12000r/min 離心10min，將沉淀溶解在100μL TE 中；加入等體積的酚- 氯仿- 異戊醇(體積比25:24:1)，輕柔顛倒混勻，12000r/min 離心5min， 6 重復(fù)抽提1 次 7 ，加1/10 體積的3mol/L 醋酸鈉(pH5.2)，2.5 倍體積的無水乙醇，－ 20℃放置30min； 8 10000r/min離心5min，棄上清液，用70% 乙醇溶液洗滌沉淀兩次。 9 室溫干燥后用20μL TE 溶解；加入0.5μL 10mg/mL 的RNaseA，37℃溫浴30min，自然冷卻后保存 求解：其中第三步加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)和第四步加入兩倍體積的無水乙醇的作用是什么？ |
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4樓2012-08-07 20:55:27
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